[发明专利]一种猪血抗菌肽的提取方法

摘要

本发明公开了一种猪血抗菌肽的提取方法，其具体步骤为：向新鲜猪血中加入六偏磷酸钠水溶液，搅拌均匀，离心后弃沉淀，调节上清液的pH值，即得抗凝猪血；向抗凝猪血中加入Alcalase酶和胰蛋白酶，微波酶解，酶解结束后调节pH，加热至沸腾，过滤，滤液即为酶解液；将酶解液超滤，纳滤，获得抗菌肽粗提液；将抗菌肽粗提液进行凝胶层析，上样后用双蒸水洗脱，收集抗菌活性较高的组分，冷冻干燥即得猪血抗菌肽。有益效果为：本发明提取方法简单可行，提取效率、得率和纯度高，制得的抗菌肽活性高、可快速杀灭细菌、有广谱的抗菌特性。 1

主权项

1.一种猪血抗菌肽的提取方法，包括猪血抗凝处理、酶解、分离、纯化，其特征在于：所述猪血抗凝处理：向新鲜猪血中加入六偏磷酸钠水溶液，搅拌均匀，离心后弃沉淀，调节上清液的pH值，即得抗凝猪血，所述六偏磷酸钠水溶液含有脂肪酸甲脂和三乙胺。

2.根据权利要求1所述的一种猪血抗菌肽的提取方法，其特征在于：所述六偏磷酸钠水溶液浓度为2‑4%，新鲜猪血和六偏磷酸钠水溶液的体积比为1:4‑6。

3.根据权利要求1所述的一种猪血抗菌肽的提取方法，其特征在于：所述六偏磷酸钠水溶液含有0.02‑0.03mM脂肪酸甲脂和0.015‑0.018mM三乙胺。

4.根据权利要求1所述的一种猪血抗菌肽的提取方法，其特征在于：所述酶解步骤为：向抗凝猪血中加入Alcalase酶和胰蛋白酶，微波酶解，酶解结束后调节pH至3.5‑4.5，静置40‑60min后加热至沸腾，保持4‑6min，冷却后过滤，滤液即为酶解液。

5.根据权利要求1所述的一种猪血抗菌肽的提取方法，其特征在于：所述加酶量为6‑7%，微波酶解温度为35‑40℃、微波功率为150‑180W、时间为3‑5h。

6.根据权利要求1所述的一种猪血抗菌肽的提取方法，其特征在于：所述Alcalase酶和胰蛋白酶的重量比为1:0.6‑0.9。

7.根据权利要求1所述的一种猪血抗菌肽的提取方法，其特征在于：所述冷却温度为2‑5℃、时间为40‑60min。

8.根据权利要求1所述的一种猪血抗菌肽的提取方法，其特征在于：所述分离步骤为：将酶解液经截留分子量为2‑4kDa的超滤膜进行超滤，获得2‑4kDa以下的肽混合物，再经400‑600Da的纳滤膜纳滤，获得400‑600Da以上的抗菌肽粗提液。

9.根据权利要求1所述的一种猪血抗菌肽的提取方法，其特征在于：所述纯化步骤为：用双蒸水平衡层析柱，将抗菌肽粗提液进行凝胶层析，上样后用双蒸水洗脱，流速为0.4‑0.6mL/min，收集抗菌活性较高的组分，冷冻干燥即得猪血抗菌肽。