[发明专利]基于含硼梳形聚合物图案化靶板富集、除盐和鉴定糖肽的方法

摘要

一种基于含硼梳形聚合物图案化靶板富集、除盐和鉴定糖肽的方法，它是利用PPA‑EAPBA梳形分子刷形成图案化表面对生物样品进行一步富集和除盐净化的处理方法，这种图案化表面可以被广泛地应用于生物样品的预处理及检测。其步骤为：合成含硼酸PPA‑EAPBA梳形分子刷；在基底上构筑疏水‑亲水‑疏水区域的封闭图案化表面；将多肽或蛋白溶液滴在上述步骤制备的图案化表面上，自然晾干，得到干燥的样品点；将基质溶液滴在上述干燥的样品点上，自然晾干后，在图案化表面上形成样品和基质均匀的共结晶，从而实现对生物样品进行富集和除盐净化处理。利用本发明构筑的图案化表面，在MALDI‑TOF MS检测中，信噪比、灵敏度及耐盐能力都有很显著的提高，具有很大的实际应用价值。

主权项

1.一种利用疏水‑亲水‑疏水区域结构的封闭图案化表面对生物样品进行在线免水洗除盐和同步富集的方法，其特征是它包括如下步骤：步骤1、合成PPA‑EAPBA梳形分子刷；步骤2、在基底上构筑疏水‑亲水‑疏水区域的封闭图案化表面；步骤3、将1μL多肽或蛋白溶液滴在上述步骤制备的图案化表面上，在室温下自然晾干，从而得到干燥的样品点；在自然晾干的过程中，由于图案化表面的中央疏水区域对蛋白或多肽有很强的疏水相互作用而对无机盐等污染物的吸附很弱，从而使无机盐等污染物被大部分转移到亲水区域，而多肽或蛋白则被吸附到中央疏水区域；步骤4、滴加0.5μL 2，5‑二羟基苯甲酸和基质在上述干燥的样品点上，基质室温下自然晾干后，在图案化表面上形成样品和基质均匀的共结晶；在此过程中，少部分原先残留在中央疏水区域的无机盐等污染物会重新溶解在水溶液里，从而被进一步带到亲水区域，而蛋白或多肽仍能保留在中央疏水区域；其中2，5‑二羟基苯甲酸的浓度为20mg/ml，基质的组成为乙腈、水和H3PO4，它们的体积比为50/49/1；步骤5、无需额外的水洗除盐步骤也无需过量的基质溶液除盐，将上述步骤富集除盐后的样品直接进行MALDI‑TOF MS的分析和检测。