[发明专利]一种VB12完全抗原的制备方法

摘要

本发明公开了一种维生素B12(VB12)完全抗原的制备方法,解决了现有维生素B12是小分子结构，无法激发免疫宿主动物产生抗体的问题，由于VB12分子结构中不具有与常规载体蛋白(BSA,KLH等)反应的活性基团，技术方案中包括保留VB12主体结构的前提下，通过添加一个合适大小的连接分子，分子末端为具有与载体蛋白HOOC‑反应的活性基团H2N‑，再通过EDC偶联反应将VB12分子连接到载体蛋白上，得到符合要求的目的完全抗原，本发明方法能生产出高产率的完全抗原，具有方法简单新颖，成本低，等优点，适用于VB12抗体的生产及免疫学检测。

主权项

1.一种维生素B12(VB12)完全抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）30℃下将1g VB12溶于12ml二甲基亚砜（DMSO）溶液中后，随后将260mgN,N'‑羰基二咪唑（CDI）加入到上述溶液中搅拌25分钟左右；（2）将2.7mmol二胺烷烃类（1,6二氨基己烷或1,4二氨基丁烷）一次加入步骤（1）反应溶液中，室温下搅拌20‑40h；（3）将步骤（2）制备的溶液倒入30ml乙酸乙酯中，将瓶子竖立起来；（4）步骤（3）混合溶液中上层清液缓慢倒出，余下残夜置于50ml丙酮中超声处理5分钟；（5）步骤（4）中反应沉淀物经过过滤后，继续用丙酮洗若干次，通过柱层析纯化上诉产物得到VB12衍生物；（6）通过质谱（MS）检测目标产物组分，确定产物纯度；（7）步骤（5）中反应物加入载体蛋白(BSA，OVA或KLH)溶液再加入1mmol碳二亚胺（EDC）室温下搅拌4小时得反应混合物，VB12衍生物与载体蛋白摩尔比为20‑50:1；（8）步骤（7）中反应混合物经过pH7.2的PBS缓冲液透析除去未结合VB12衍生物即得到目标产物完全抗原。