[发明专利]栽培茄SmHQT基因核心片段及其RNAi表达载体和应用

摘要

本发明公开了栽培茄SmHQT基因核心片段、含其的RNAi表达载体及其构建和应用，栽培茄SmHQT基因核心片段如SEQ ID No.3所示。本发明通过沉默SmHQT基因培育绿原酸合成减少的栽培茄品种，达到减轻栽培茄果肉褐化的目的，新的栽培品种具有良好的市场前景和经济价值。

主权项

1.栽培茄SmHQT基因核心片段，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.含有权利要求1所述SmHQT基因核心片段的RNAi表达载体。

3.如权利要求2所述的RNAi表达载体，其特征在于：所述RNAi表达载体是以pBin19载体为骨架载体，在多克隆酶切位点处插入顺序连接的CaMV35S启动子、栽培茄SmHQT基因核心片段的正向序列、DET内含子、栽培茄SmHQT基因核心片段的反向序列和Nos终止子表达框而构建成的。

4.含有权利要求2或3所述RNAi表达载体的微生物转化体，其特征在于，其是以农杆菌为受体而转化得到的。

5.权利要求1所述的栽培茄SmHQT基因核心片段、权利要求2或3所述的RNAi表达载体，或权利要求4所述的微生物转化体，用于下述至少一种用途：

1)降低栽培茄中SmHQT基因的表达水平；

2)降低栽培茄果实中绿原酸的合成量；

3)降低栽培茄果肉在有氧环境中的褐化程度和/或褐化速度。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述表达水平或合成量的降低表现在栽培茄嫩叶、成熟叶和果实中的至少一处。

7.培育SmHQT基因表达水平低、绿原酸合成量低、和/或果肉在有氧环境中褐化程度和/或褐化速度低的栽培茄的方法，包括，使用权利要求1所述的栽培茄SmHQT基因核心片段、权利要求2或3所述的RNAi表达载体，或权利要求4所述的微生物转化体。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述表达水平低或合成量低表现在栽培茄嫩叶、成熟叶和果实中的至少一处。

9.权利要求2或3所述RNAi表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

a.以含SEQ ID No.3所示序列的重组质粒为模板，以SEQ ID No.2和SEQ ID No.1为引物进行PCR扩增，将扩增产物用HindIII和XbaI双酶切，再与经同样双酶切的pHBLD载体连接，获得重组质粒pHBLD‑SmHQT；

b.按步骤a的方法进行PCR扩增或者直接使用步骤a所得PCR扩增产物，将扩增产物用KpnI和XhoI双酶切，再与经同样双酶切的重组质粒pHBLD‑SmHQT连接，获得重组质粒pHBLD‑SmHQTi；

c.将步骤b所得重组质粒pHBLD‑SmHQTi用SacI和SpeI双酶切，再与经SacI和XbaI双酶切的pBin19载体连接，得所述RNAi表达载体。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述含SEQ ID No.3所示序列的重组质粒的制备方法包括：以栽培茄的cDNA为模板，以SEQ ID No.2和SEQ ID No.1为引物进行扩增，将扩增产物与pMD‑T19载体连接，得含SEQ ID No.3所示序列的重组质粒。