[发明专利]一种来考诺肽的制备方法

摘要

本发明涉及一种来考诺肽的制备方法，解决了现有技术的副产物多、难纯化且产率低的技术问题。本发明提供一种来考诺肽的制备方法，以Fmoc‑氨基树脂为固相合成的载体，依次缩合27个保护氨基酸，得到来考诺肽的全保护前体线性肽树脂，然后分别进行固相和液相二硫键环化反应，形成3对二硫键的3组Cys的侧链保护基分别为Trt、Acm和Mob，再分别脱除Cys的侧链保护基，定向形成二硫键，提高二硫键连接的准确率，得到的粗肽经纯化、冻干，得到来考诺肽纯品多肽。本发明广泛应用于多肽药物制备技术领域。

主权项

1.一种来考诺肽的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：1)缩合反应：在缩合体系中，以Fmoc氨基树脂为固相合成的载体，树脂经脱保护、洗涤、缩合反应：从C端至N端依次缩合27个活化后的侧链保护的氨基酸，得线性全保护肽树脂，所述线性全保护肽树脂为Cys(Trt)-Lys(Boc)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Gly-Ala-Lys(Boc)-Cys(Acm)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Leu-Met-Tyr(tBu)-Asp(OtBu)-Cys(Mob)-Cys(Trt)-Ser(tBu)-Gly-Ser(tBu)-Cys(Acm)-Ser(tBu)-Gly-Thr(OtBu)-Val-Gly-Arg(Pbf)-Cys(Mob)-氨基树脂；所述线性全保护肽树脂中形成三组二硫键的Cys的侧链保护基分别为Trt、Acm以及Mob；所述的依次连接保护氨基酸顺序为：Fmoc-Cys(Mob)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Thr(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Mob)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH；2)脱除步骤1)制得的线性全保护肽树脂上除Cys(Acm)和Cys(Mob)以外其它氨基酸的侧链保护基，并切割树脂，得线性粗肽；3)氧化步骤2)制得的线性粗肽，环化形成第一对二硫键，得一环粗肽；4)脱除步骤3)制得的一环粗肽上Cys(Acm)的Acm保护基，环化形成第二对二硫键，得二环粗肽；5)脱除步骤4)制得的二环粗肽上Cys(Mob)的Mob保护基，环化形成第三对二硫键，得来考诺肽粗肽；6)将步骤4)制得的来考诺肽粗肽纯化、冻干，得来考诺肽纯品。