[发明专利]从微量样品中提取和消化蛋白质的方法、定量检测及应用在审
| 申请号： | 201810146491.9 | 申请日： | 2018-02-12 |
| 公开（公告）号： | CN110161155A | 公开（公告）日： | 2019-08-23 |
| 发明（设计）人： | 任艳;范徉;梁莉媛;林志龙;张可人;李思奇;刘斯奇 | 申请（专利权）人： | 深圳华大生命科学研究院 |
| 主分类号： | G01N30/06 | 分类号： | G01N30/06;G01N30/72;G01N30/88 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 赵天月 |
| 地址： | 518083 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种从微量组织中提取和消化蛋白质的方法、定量检测及应用。所述方法包括：向组织样品中加入裂解液，进行裂解，所述裂解液包括蛋白变性剂和蛋白酶抑制剂，所述裂解液中含有可挥发的碱性试剂，所述蛋白变性剂为可适用于质谱上机鉴定的质谱兼容性变性剂；将裂解后的组织样品进行超声处理；向超声处理后的样品中加入还原剂进行温育，然后加入烷基化试剂进行烷基化处理；向经过烷基化处理后的溶液中加入胰蛋白酶进行酶解；向酶解后的样品中加入酸性试剂，然后离心取上清，得到肽段溶液。该方法操作简单，可提升样本中蛋白质的提取量，增加蛋白质的鉴定和定量。 | ||
| 搜索关键词： | 蛋白质 裂解液 蛋白变性剂 超声处理 定量检测 组织样品 裂解 酶解 质谱 胰蛋白酶 蛋白酶抑制剂 烷基化试剂 消化 碱性试剂 酸性试剂 微量样品 微量组织 变性剂 还原剂 兼容性 提取量 挥发 上机 温育 肽段 应用 样本 | ||
【主权项】：
1.一种从微量样品中提取和消化蛋白质的方法，其特征在于，包括：向样品中加入裂解液，进行裂解，所述裂解液包括蛋白变性剂和蛋白酶抑制剂，所述裂解液中含有可挥发的碱性试剂，所述蛋白变性剂为可适用于质谱上机鉴定的质谱兼容性变性剂；将裂解后的组织样品进行超声处理；向超声处理后的样品中加入还原剂进行温育，然后加入烷基化试剂进行烷基化处理；向经过烷基化处理后的溶液中加入胰蛋白酶进行酶解；向酶解后的样品中加入酸性试剂，然后离心取上清，得到肽段溶液。
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