[发明专利]一种诱导骨髓基质干细胞向神经细胞分化的方法

摘要

本发明涉及一种诱导骨髓干细胞向神经细胞分化的方法。属骨髓干细胞分化为神经干细胞的方法。本发明在实施过程中取自体的骨髓干细胞和嗅鞘细胞，可排除异性蛋白排斥反应，避免道德和伦理压力，减轻病人经济负担；培养过程中采取分阶段诱导骨髓干细胞分化，诱导神经细胞前体进一步分化为成熟细胞，从而获得生物性状稳定，体外存活时间长，分化成熟的神经细胞。在培养过程向培养基中加入一定量的海藻糖和蔗糖，意外的发现海藻糖和蔗糖的加入使细胞分化为神经前体细胞的比例增加，分化周期缩短，从而可以短时间内得到大批量的成熟神经细胞。

主权项

1.一种诱导骨髓基质干细胞向神经细胞分化的方法，其特征是，具体步骤为：（1）骨髓基质干细胞的培养；（2）嗅鞘细胞的培养；（3）将骨髓基质干细胞和嗅鞘细胞共培养将步骤（1）和步骤（2）培养得到的骨髓基质干细胞和嗅鞘细胞共培养于非直接接触的Tranwells体系中，模拟人体环境共培养在DMEM/F12培养基中，骨髓基质干细胞培养在多聚赖氨酸处理的培养片上，嗅鞘细胞培养于孔径为0.4μm的多孔膜的管芯中；每2‑3天更换一次培养液，共培养两周，显微观察细胞形态学变化，并采用免疫组化与 实时荧光定量PCR（RT‑PCR）检测神经元特异性标志物 nestin、NSE、β‑III‑tubulin 与 MAP2，以及神经胶质细胞特异性标志物 GFAP 与 p75NTR 的变化，证实经 OECs 体外诱导BMSCs向神经前体细胞分化，得到BMSCs 来源的神经前体细胞；（4）bFGF 诱导 BMSCs 来源的神经前体细胞的进一步分化将步骤（3）培养得到的BMSCs 来源的神经前体细胞接种于含有2‑20ng/mL bFGF的DMEM培养基中，接种量为4‑6×105个细胞/mL培养基，培养时间为5‑7天，得到成熟神经细胞；步骤（3）中DMEM/F12培养基中还含有海藻糖和蔗糖，海藻糖和蔗糖质量比为3：1；步骤（4）中在DMEM培养基还含有质量比为3：1的海藻糖和蔗糖;步骤（3）中海藻糖的加入量为每升DMEM/F12培养基中0.05‑2mg；步骤（3）中蔗糖的加入量为每升DMEM/F12培养基中0.02‑0.6mg；步骤（4）中海藻糖的加入量为每升DMEM培养基中加0.05‑1mg；步骤（4）中蔗糖的加入量为每升DMEM培养基中加0.02‑0.3mg。