[发明专利]一种非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒、制备方法及使用方法

摘要

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒，包括ASFV‑反应液、DNA酶混合液、ASFV‑内标、ASFV‑阳性对照、ASFV‑阴性对照、核酸释放剂以及ASFV‑定量参考品，所述ASFV‑反应液包括：引物：ASF03F03和ASF03R03；内标引物：IPC05F01和IPC05R01；探针ASF03P和内标探针IPC05P；所述引物和探针对应于非洲猪瘟病毒p72基因的高度保守片段。本发明还公开了一种制备上述非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒的方法以及使用其的检测方法。

主权项

1.一种非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，包括ASFV‑反应液、DNA酶混合液、ASFV‑内标、ASFV‑阳性对照、ASFV‑阴性对照、核酸释放剂以及ASFV‑定量参考品；其中，所述ASFV‑反应液包括：引物：ASF03F03：5’‑GATGATGATTACCTTYGCYTTG‑3’和ASF03R03：5’‑CAACTAATATAAAAYTCTCTTGCTCT‑3’；内标引物：IPC05F01：5’‑CATAGTTGGACCGCTAGGA‑3’和IPC05R01：5’‑GAAAGGTCCCGCAAAGAGT‑3’；探针：ASF03P：5’‑Fam‑CCACGGGAGGAATAYCAAC‑Mgb‑3’，Fam为报告荧光基团，Mgb为淬灭荧光基团；内标探针：IPC05P：5’‑Hex‑CCGGTGATAAACCTTTGGACCCT‑Bhq1‑3’，Hex为报告荧光基团，Bhq1为淬灭荧光基团；所述引物和探针对应于非洲猪瘟病毒p72基因的高度保守片段，所述非洲猪瘟病毒p72基因的高度保守片段的扩增目标核苷酸序列为:GATGATGATTACCTTTGCTTTGAAGCCACGGGAGGAATATCAACCCAGTGGTCATATTAACGTATCCAGAGCAAGAGAATTTTATATTAGTTG。