[发明专利]一种新的基因组甲基化文库的构建方法和应用

摘要

本发明提供了一种甲基化测序文库的构建方法。具体地，本发明通过重亚硫酸盐处理构建文库，可同时检测经CT转化的原始链和未经CT转化的互补链序列，直接找出甲基化位点；本发明构建的文库保留了一半未经CT转化的碱基，可大大提高文库碱基平衡性，大幅提高测序质量。

主权项

1.一种甲基化测序文库的构建方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(a)提供一待测样本，将样本中的DNA打断，从而得到片段化DNA；(b)将所述片段化DNA的5′‑磷酸基团去除，从而得到5′去磷酸化DNA；(c)对所述5′去磷酸化DNA进行补平反应，从而得到5′去磷酸化的平末端DNA；(d)将所述平末端DNA与具有茎环结构的第一衔接子进行连接反应，从而得到第一连接产物；(e)利用5‑methyl‑dCTP，以第一连接产物的一条单链为模板进行扩增反应，从而得到第一扩增产物；和(f)利用所述的第一扩增产物得到甲基化测序文库；其中，所述的第一扩增产物包含：(i)具有从5′到3′的式A结构的第一扩增产物A，和(ii)具有从5′到3′的式B结构的第一扩增产物B，S_a‑L‑S_bm  (A)S_b‑L‑S_am  (B)式中，各“‑”独立地为键；S_a为所述第一连接产物的一条单链；S_b为所述第一连接产物的一条单链，且S_b的序列与S_a的序列反向互补；S_am以S_b为模板合成，S_am为S_b的互补链，且S_am中的碱基C均为甲基化碱基C；S_bm以S_a为模板合成，S_bm为S_a的互补链，且S_bm中的碱基C均为甲基化碱基C；L为第一衔接子。