[发明专利]一种检测猪脾转移因子与猪瘟活疫苗联合免疫效果的方法

摘要

本发明提供了一种检测猪脾转移因子与猪瘟活疫苗联合免疫效果的方法，包括以下步骤：1）细胞培养；2）细胞接种，控制细胞密度；3）将猪瘟活疫苗与猪脾转移因子上样于细胞培养板中，培养孵育细胞；4）将细胞用MTT溶液进行反应，继续孵育，然后用DMSO进行溶解处理，最后将细胞板放置与酶标仪中测量OD值，计算细胞活性。本发明方法具有检测背景低、灵敏度高、专属性强、准确度高、重复性好等优点，尤其适用于猪脾转移因子和猪瘟活疫苗联合免疫时生物活性的检测及质量标准的建立。

主权项

1.一种检测猪脾转移因子与猪瘟活疫苗联合免疫效果的方法，其特征在于：其包括以下步骤：1）取猪瘟活疫苗原液，用含1.8‑2.2%新生牛血清、0.8‑1.2%青霉素‑链霉素双抗的完全DMEM培养基稀释至含100 RID的病毒液；取猪脾转移因子，用含1.8‑2.2%新生牛血清、0.8‑1.2%青霉素‑链霉素双抗的完全DMEM培养基稀释将多肽含量稀释至1 mg/mL；2）在含8‑12%新生牛血清、0.8‑1.2%青霉素‑链霉素双抗的完全DMEM培养基中将细胞培养至单层；3) 取步骤2)中的单层细胞，用含8‑12%新生牛血清、0.8‑1.2%青霉素‑链霉素双抗的完全DMEM培养基稀释，调整细胞浓度为2~3×105个/mL，将稀释后的细胞接种于细胞培养板中，继续培养；形成细胞单层后用磷酸盐缓冲液洗涤细胞板，去除培养基；4）将步骤1）稀释后的病毒液以及稀释后的猪脾转移因子上样于步骤3）的细胞培养板中，并培养孵育细胞；上样量为100 μL/孔，具体如下：含1.8‑2.2%新生牛血清、0.8‑1.2%青霉素‑链霉素双抗的完全DMEM培养基25‑35μL ；病毒液30‑40μL；猪脾转移因子30‑40 μL；5) 将步骤4）孵育的细胞用MTT溶液进行反应，继续孵育；6) 将步骤5）孵育的细胞用二甲基亚砜进行溶解处理；7）将步骤6）处理后的细胞板放置于酶标仪中测量OD值，测定细胞活性。