[发明专利]一种基于药物靶点停留时间的细胞洗脱方法

摘要

一种基于药物靶点停留时间的细胞洗脱方法，其方法特征是将待测化合物与表达有药物靶点的细胞充分孵育，通过重复三次洗脱、孵育、离心步骤，不断移除从药物靶点解离的待测化合物，随后使用细胞功能实验，检测经洗脱后，未从药物作用靶点解离的化合物所产生功效，所得结果与同等浓度的待测化合物和表达有药物靶点的细胞充分孵育后，未经洗脱、孵育、离心步骤，所产生的功效进行对比，分析所测化合物停留时间的长短。该细胞洗脱实验方法具有无污染，高通量，操作简单等特点。

主权项

1.一种基于药物靶点停留时间的细胞洗脱方法，其方法步骤特征为：(1)收集表达药物靶点的稳转细胞或者组织分离的内源性细胞，等分成两份，分别标记为a组、b组；(2)将a组细胞置于细胞洗脱实验反应缓冲液中，加入过量的待测化合物，在37℃下孵育1小时，使该待测化合物与细胞上表达的药物靶点充分结合；孵育1小时后，将所得细胞混合物转移至离心管中，在4℃下离心3分钟，转速设定为300×g；离心结束后，弃除上清液，以分离未与细胞上药物靶点结合的化合物；分离结束后，加入洗脱实验反应缓冲液，反复吹打分散离心管底部的细胞，充分混匀后在37℃下孵育10分钟，促进待测化合物从药物作用靶点上的解离过程；孵育结束后，将孵育后的细胞混合物再次转移至离心管中，在4℃下离心3分钟，转速设定为300×g，离心结束后弃去上清液，移除经洗脱从药物作用靶点上解离的化合物；重复上述细胞洗脱步骤，包括：吹打分散离心后的细胞、加入细胞洗脱实验反应缓冲液孵育、离心洗脱移除从药物作用靶点上解离的化合物，共计3次；向洗脱后的细胞中，加入细胞功能实验反应缓冲液，在37℃下孵育1小时后，检测细胞功能水平；(3)将b组细胞置于与步骤(2)中相同的细胞功能实验反应缓冲液中，加入与步骤(2)中同等浓度的待测化合物，在37℃下孵育1小时后，检测细胞功能水平；(4)比较上述步骤(2)和步骤(3)中所测细胞功能学水平的差异，具有较短停留时间化合物两组数值差异较大；具有较长停留时间化合物两组数值差异较小。