[发明专利]一种表达环状RNA的真核表达载体有效
| 申请号： | 201810166541.X | 申请日： | 2018-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN108103100B | 公开（公告）日： | 2020-07-03 |
| 发明（设计）人： | 熊炜;郭灿;熊芳;曾朝阳;刘凌云;李勇;王裕民;莫勇真;廖前进;周钰娟;李小玲;李桂源 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C12N15/113 |
| 代理公司： | 长沙市融智专利事务所(普通合伙) 43114 | 代理人： | 袁靖 |
| 地址： | 410083 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种表达环状RNA的真核表达载体。本发明普遍适用于各种circRNA的成环表达，表达效率高效、稳定；满足绝大多数circRNA的表达需求；应用该种载体表达circRNA操作简单易行，易于推广。本发明为研究circRNA的功能和机制提供了一个有力的研究工具，为进一步确定circRNA分子作为新型标志物及疾病治疗靶标的研究和开发提供理论支持。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 环状 rna 载体 | ||
【主权项】：
1.一种表达环状RNA的真核表达载体，其特征在于，它是由如下方法构建的：(1)根据circRNA的形成机制和真核生物RNA剪接的基本法则，设计出适用于circRNA表达的上、下游成环序列；根据载体的序列信息，设计多克隆位点；上游成环序列：GTGCTGGGATTACAGGTGTGAGCTACCACCCCCGGCCCACTTTTT；下游成环序列：GAAAAGAATTAGGCTCGGCACGGTAGCTCACACCTGTAATCCCAGCA，上、下游成环序列中间为多克隆位点序列，多克隆位点序列用于酶切插入需要成环的序列；人工合成从而得到完整的实现circRNA过表达的DNA序列；(2)将上述合成的实现circRNA过表达的DNA序列的两端添加酶切位点序列，通过双酶切后构建入载体中，得到pcCirc空白质粒，测序确认质粒正确；(3)选择多克隆位点序列中的酶切位点用于酶切pcCirc空白质粒，并将需要成环的序列插入载体的上、下游成环序列之间。
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