[发明专利]一种用于生物标记物筛选的抗体合成方法

摘要

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种用于生物标记物筛选的抗体合成方法，包括以下步骤：S1、动物的选择与免疫，选择纯种BALB/C小鼠进行免疫；S2、细胞融合：A1、制备饲养细胞层；A2、制备免疫脾细胞；A3、制备骨髓细胞；A4、融合；S3、选择培养：使用HAT选择培养7‑10天，之后使用HT培养液培养2周，之后采用一般培养液；S4、杂交瘤克隆化；S5、克隆抗体的大量生产。本发明提出了一种能够量产抗体的方法，过程简单，成本低，应用广泛，适用于生物标记物筛选用抗体的生成。

主权项

1.一种用于生物标记物筛选的抗体合成方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、动物的选择与免疫，选择纯种BALB/C小鼠进行免疫；S2、细胞融合：A1、制备饲养细胞层：选取BALB/C小鼠，7‑9周，处死，浸泡在75%酒精内，3‑5min，剪开皮肤暴露腹膜，注入5‑6ml预冷的培养液，反复冲洗吸出冲洗液，离心分离，用20%小牛血清的培养液混悬，加入96孔板；A2、制备免疫脾细胞：取S1中加强免疫的小鼠处死，取脾研碎，用培养液洗2次，取脾淋巴细胞悬液备用；A3、制备骨髓细胞：取对数生长骨髓瘤细胞离心，用无血清培养液洗2次，计数，取得细胞备用；A4、融合；S3、选择培养：使用HAT选择培养7‑10天，之后使用HT培养液培养2周，之后采用一般培养液；S4、杂交瘤克隆化；S5、克隆抗体的大量生产：B1、先腹腔注射0.5ml Pristane或液体石蜡于BALB/C鼠；B2、1‑2周后腹腔注射杂交瘤细胞；B3、密切观察动物的健康状况与腹水征象，待腹水尽可能多，而小鼠频于死亡之前，处死小鼠，用滴管将腹水吸入试管中。