[发明专利]一种低表达BDNF转基因鼠模型及其构建方法与应用在审
| 申请号： | 201810171687.3 | 申请日： | 2018-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN108588125A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 胡滔;常业飞;习杨彦彬;毛瑞;佟钧;王廷华;张连峰 | 申请（专利权）人： | 云南省第三人民医院;昆明医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京权智天下知识产权代理事务所(普通合伙) 11638 | 代理人： | 张廷利 |
| 地址： | 650000 *** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种低表达BDNF转基因鼠模型及其构建方法与应用，该构建方法包括以下步骤：构建CMV‑EmGFP‑siRNA‑BDNF低表达转基因片段，用构建好的沉默质粒转染293T细胞，然后用RT‑PCR的方法筛选出沉默效果最好的；用AvrII将干扰效率最高的沉默质粒线形化，获得转基因片段，调整浓度至5ng/μL，用于显微注射；将构建好的转基因片段线性化，用显微注射法制作转基因小鼠；PCR鉴定阳性转基因鼠。本发明首次获得低表达BDNF转基因鼠模型，为阐明脑老化发病分子机制提供新的研究工具，并开辟了新思路。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 低表达 转基因鼠模型 转基因片段 显微注射 阳性转基因 转基因小鼠 沉默效果 分子机制 研究工具 质粒转染 脑老化 线形化 线性化 质粒 应用 筛选 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种低表达BDNF转基因鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、CMV‑EmGFP‑siRNA‑BDNF低表达转基因片段的构建：沉默表达载体CMV‑EmGFP‑siRNA‑BDNF购买自Invitrogen公司，并用该公司网站提供的软件针对目的基因BDNF(GeneID:12064)的靶位点，其中，靶位点为CCAAGTGTAATCCCATGGGTT，设计沉默的质粒，然后由中美泰和公司完成质粒构建；步骤2、用构建好的沉默质粒转染293T细胞，然后用RT‑PCR的方法筛选出沉默效果最好的；步骤3、用AvrII将干扰效率最高的沉默质粒线形化，获得转基因片段，调整浓度至5ng/μL，用于显微注射；步骤4、将构建好的转基因片段线性化，用显微注射法制作转基因小鼠；PCR鉴定阳性转基因鼠。
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