[发明专利]一种耐高浓度木质纤维素预处理副产物的β-葡萄糖苷酶高通量筛选方法在审
| 申请号： | 201810172803.3 | 申请日： | 2018-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN108396055A | 公开（公告）日： | 2018-08-14 |
| 发明（设计）人： | 赵喜华;李汉昕;易拾 | 申请（专利权）人： | 江西师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/34 | 分类号： | C12Q1/34 |
| 代理公司： | 南昌华成联合知识产权代理事务所(普通合伙) 36126 | 代理人： | 黄晶 |
| 地址： | 330000 *** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明涉及高通量筛选领域，提供了一种耐高浓度木质纤维素预处理副产物的β‑葡萄糖苷酶高通量筛选方法。该方法的主要步骤：将β‑葡萄糖苷酶于含有七叶苷和枸橼酸铁铵的平板培养基上进行分泌表达，挑取阳性克隆子于普通平板培养基上生长，再将七叶苷、枸橼酸铁铵和木质纤维素预处理副产物(糠醛、5‑羟甲基糠醛、甲酸、乙酸、乙酰丙酸、木质素衍生物、盐等)加入到普通平板培养基上，于一定温度下反应1‑2h，获得能产生黑色光圈的突变酶。该方法可应用于基于定向进化的耐高浓度木质纤维素预处理副产物β‑葡萄糖苷酶的高通量筛选，使耐高浓度木质纤维素预处理副产物的β‑葡萄糖苷酶更适合于二代生物能源生产、食品工业、制药等领域。 | ||
| 搜索关键词： | 预处理 木质纤维素 葡萄糖苷酶 副产物 高通量筛选 平板培养基 枸橼酸铁铵 七叶苷 光圈 乙酸 木质素衍生物 阳性克隆子 羟甲基糠醛 定向进化 分泌表达 生物能源 乙酰丙酸 突变酶 甲酸 糠醛 制药 生长 应用 生产 | ||
【主权项】：
1.一种耐高浓度木质纤维素预处理副产物的β‑葡萄糖苷酶高通量筛选方法，其特征在于，采用显色化合物平板培养基进行高通量筛选耐木质纤维素预处理副产物的β‑葡萄糖苷酶，具体包括以下步骤：(1)将β‑葡萄糖苷酶于含有七叶苷和枸橼酸铁铵的平板培养基上进行分泌表达；(2)挑取阳性克隆子于普通平板培养基上生长；(3)再将七叶苷溶液、枸橼酸铁铵溶液和含有木质纤维素预处理副产物的溶液加入到长有阳性克隆子的普通平板培养基上，于一定温度下反应1‑2h，获得能产生黑色光圈的突变酶。
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