[发明专利]一种抗原特异性B细胞筛选方法及其在单克隆抗体制备中的应用在审
| 申请号： | 201810180889.4 | 申请日： | 2018-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN110218703A | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 沈萍萍;刘培;张瑞旋 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/26;G01N33/74 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210046 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种单克降抗体的制备方法及其应用，所述制备方法包括以下步骤：步骤一，B细胞的获取、富集及纯化；步骤二，抗原特异性B细胞的获取；步骤三，将上述抗原特异性B细胞永生化细胞系；步骤四，一步法检测永生化细胞系阳性克隆；本发明提供了一种单克隆抗体的方法，该方法能获得抗原特异性B细胞以制备杂交瘤，减少了非抗原特异性细胞的干扰，大大改进传统方法的成功率，准确率；另外本发明采用一步法筛选阳性克隆株，比传统ELISA方法快速简便。 | ||
| 搜索关键词： | 抗原特异性 制备 单克隆抗体 永生化 抗原特异性细胞 筛选 阳性克隆株 一步法检测 阳性克隆 一步法 杂交瘤 准确率 富集 抗体 成功率 应用 改进 | ||
【主权项】：
1.一种抗原特异性B细胞筛选方法及其在单克隆抗体制备，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，B细胞的获取、富集及纯化：将免疫后小鼠脾细胞分离剪碎研磨，过200目筛网，采用密度梯度离心纯化。步骤二，抗原特异性B细胞的获取，将以荧光或生物素标记的蛋白与步骤一中的B细胞进行特异性结合，随后用SA‑Bead分选与蛋白特异性结合的细胞。步骤三，将上述抗原特异性B细胞永生化细胞系：将步骤二中分离出的抗原特异性B细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合，获得永生化的细胞系。步骤四，一步法检测永生化细胞系阳性克隆：采用磁珠标记的抗原和荧光标记的二抗检测永生化的细胞系，实时检测。
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