[发明专利]一种miR-574-5p靶基因筛选的方法在审
| 申请号： | 201810193251.4 | 申请日： | 2018-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN108300761A | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 侯金星;安小鹏;曹斌云;宋宇轩;李广;王建刚;刘育含 | 申请（专利权）人： | 杨凌职业技术学院;西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;C12Q1/6851;G01N33/68 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 712100 陕西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种筛选miR‑574‑5p靶基因的方法，该方法以山羊基因组DNA序列为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用MAP3K9引物在PCR条件下进行扩增MAP3K9基因3'UTR区；构建双荧光素酶报告系统，检测荧光素酶活性，结果显示，miR‑574‑5p降低了荧光素酶的活性，初步确定MAP3K9为miR‑574‑5p的靶基因；采用RT‑qPCR和Western blot方法验证miR‑574‑5p对MAP3K9基因在mRNA和蛋白水平表达的影响。结果显示：miR‑574‑5p可以抑制MAP3K9基因在mRNA和蛋白水平上的表达，进一步确定miR‑574‑5p可与MAP3K93'UTR结合，MAP3K9是miR‑574‑5p的靶基因，为进一步研究miR‑574‑5p对奶山羊乳腺发育和泌乳功能的影响奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 靶基因 蛋白水平 基因 荧光素酶报告系统 山羊基因组DNA 筛选 荧光素酶活性 荧光素酶 奶山羊 乳腺 缓冲 构建 扩增 泌乳 引物 验证 发育 检测 研究 | ||
【主权项】：
1.一种miR‑574‑5p靶基因筛选的方法，其特征在于，包括下列步骤：1)以山羊基因组DNA为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物MAP3K9在PCR条件下进行扩增，确定得到的PCR产物为MAP3K9基因3'UTR区的序列；2)构建双荧光素酶报告系统，检测荧光素酶活性，初步鉴定miR‑574‑5p的靶基因；3)采用RT‑qPCR法检测miR‑574‑5p对MAP3K9基因在mRNA水平的影响；4)采用Western blot法检测miR‑574‑5p对MAP3K9基因在蛋白水平的影响。
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