[发明专利]一种miR-181b靶基因筛选的方法在审
| 申请号： | 201810193262.2 | 申请日： | 2018-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN108531544A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 曹斌云;安小鹏;宋宇轩;李广;高可心 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;C12Q1/6851;G01N33/68 |
| 代理公司： | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人： | 李郑建 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种筛选miR‑181b靶基因的方法，该方法以山羊卵巢组织cDNA为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物RUNX1在PCR条件下进行扩增，得到确定的PCR产物为RUNX1基因3'UTR区的序列；然后构建双荧光素酶报告系统，检测荧光素酶活性，初步鉴定miR‑181b的靶基因；采用RT‑qPCR法检测miR‑181b对RUNX1基因在mRNA水平的影响；采用Western blot法检测miR‑181b对RUNX1基因在蛋白水平的影响。明确了RUNX1 3'UTR区存在与miR‑181b的结合位点，利用现代分子生物技术验证了miR‑181b与靶基因RUNX1的靶向调控关系，miR‑181b可以抑制RUNX1基因在mRNA和蛋白水平上的表达，进一步确认了RUNX1是miR‑181b的目标靶基因。为进一步研究miR‑181b对奶山羊乳卵巢发育和产羔性能的影响奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 靶基因 基因 蛋白水平 检测 荧光素酶报告系统 卵巢 筛选 分子生物技术 荧光素酶活性 调控关系 结合位点 山羊卵巢 目标靶 奶山羊 缓冲 靶向 构建 扩增 引物 验证 发育 研究 | ||
【主权项】：
1.一种筛选miR‑181b靶基因的方法，其特征在于，包括下列步骤：1)以山羊卵巢组织cDNA为模板，在Taq DNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，利用引物RUNX1在PCR条件下进行扩增，得到确定的PCR产物为RUNX1基因3'UTR区的序列；2)构建双荧光素酶报告系统，检测荧光素酶活性，初步鉴定miR‑181b的靶基因；3)采用RT‑qPCR法检测miR‑181b对RUNX1基因在mRNA水平的影响；4)采用Western blot法检测miR‑181b对RUNX1基因在蛋白水平的影响。
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