[发明专利]一种改良的农杆菌介导大豆整体转化方法在审
| 申请号： | 201810194837.2 | 申请日： | 2018-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN108374020A | 公开（公告）日： | 2018-08-07 |
| 发明（设计）人： | 邢邯;徐筋燕;薛晨晨;黄颜众;赵晋铭;郭娜 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/54 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 傅婷婷;徐冬涛 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种改良的农杆菌介导大豆整体转化方法，是将含有外源DNA的质粒导入根癌农杆菌中，得到重组农杆菌，将所得到的重组农杆菌用如下溶液进行悬浮后，通过自制的工具，在大豆开花的当天下午3～4点对大豆的子房壁进行针扎和注射处理，进行遗传转化:溶剂为水，溶质是非离子表面活性剂Sillwet L‑77，蔗糖和乙酰丁香酮；其中，Sillwet L‑77的体积百分比浓度为0.1％‑0.3％，蔗糖的质量百分比浓度为5％，乙酰丁香酮的质量百分比浓度为0.003％。利用本方法将一个大豆热激蛋白90合成相关的基因导入大豆植株中，获得转基因大豆植株。 | ||
| 搜索关键词： | 大豆 农杆菌介导 乙酰丁香酮 质量百分比 重组农杆菌 整体转化 蔗糖 离子表面活性剂 转基因大豆植株 改良 根癌农杆菌 体积百分比 大豆植株 热激蛋白 遗传转化 外源DNA 子房壁 溶剂 溶质 质粒 悬浮 注射 自制 合成 开花 基因 | ||
【主权项】：
1.一种改良的农杆菌介导大豆整体转化方法，其特征在于具体包括如下步骤：选取携带目的基因的根癌农杆菌培养至OD600值在0.8‑1.2，离心后去上清液,加入与上清液等体积的溶液A,混匀得农杆菌转化液；选取大豆开花的当天下午3～4点对大豆的子房壁进行注射农杆菌转化液处理，操作完成后加套塑料袋保湿，维持至次日凌晨5:00～6:00；其中,所述的溶液A以水为溶剂，溶质为非离子表面活性剂Sillwet L‑77，蔗糖和乙酰丁香酮；其中，Sillwet L‑77的体积百分比浓度为0.1％‑0.3％，蔗糖的质量百分比浓度为3％‑5％，乙酰丁香酮的质量百分比浓度为0.001‑0.004％，乙酰丁香酮用适量二甲基亚砜溶解。
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