[发明专利]多功能植物双元质粒pPBEL-BiFC的构建方法及其应用在审
| 申请号： | 201810196895.9 | 申请日： | 2018-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN108546709A | 公开（公告）日： | 2018-09-18 |
| 发明（设计）人： | 丁晓东;宋雨;尤宏光;刘圆明;张航;李强;朱延明 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 | 代理人： | 董芙蓉 |
| 地址： | 150030 黑龙江省哈*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明公开了多功能植物双元质粒pPBEL‑BiFC的构建方法及其应用，属于基因工程技术领域，该方法包括以下步骤：改造原有的多克隆位点，把原有的MCS区进行敲除，引入两段新的MCS区，可以有更多的酶切位点选择。对原有的GFP进行改造，代替GFP，引入YFP‑C段和YFP‑N段在载体的不同位置，YFP‑C段和YFP‑N段分别在两个载体的局面。引入了HA和MYC标签，能进行western‑blot蛋白检测，HA上连接A蛋白，MYC上连接B蛋白，通过检测A蛋白进行western‑blot分析，进而检测是否有B蛋白存在，反之亦然。本发明构建的质粒能进行Co‑IP免疫共沉淀反应。 | ||
| 搜索关键词： | 原有的 构建 多功能植物 双元质粒 引入 蛋白 免疫共沉淀反应 基因工程技术 多克隆位点 蛋白检测 酶切位点 检测 两段 敲除 质粒 应用 改造 分析 | ||
【主权项】：
1.一种多功能植物双元质粒pPBEL‑BiFC的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1.改造原有的多克隆位点，把原有的MCS区进行消除，引入两段新的MCS区，能有更多的酶切位点选择；步骤2.对原有的GFP进行消除，代替GFP和Hyg基因，引入YFP‑C155段和YFP‑N173段；步骤3.引入了HA和MYC标签，能进行western‑blot蛋白检测，使HA‑A蛋白‑YFP‑C155，MYC‑B蛋白‑YFP‑N173融合蛋白同时表达，通过检测A蛋白进行western‑blot分析，进而检测是否有B蛋白存在，反之亦然。
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