[发明专利]一种紫果西番莲顶梢的组培育苗方法

摘要

一种紫果西番莲顶梢的组培育苗方法，该方法包括外植体抗褐化、消毒处理、腋芽初诱导培养、愈伤组织诱导培养、继代增殖培养、生根诱导培养和瓶苗移栽技术环节；以幼嫩顶梢为外植体，用抗氧化剂Vc和柠檬酸混合溶液浸泡，又用高锰酸钾溶液浸泡杀菌，提高幼嫩外植体的抗氧化、抗褐变的能力和活力；在腋芽初诱导、愈伤组织诱导和继代增殖培养3阶段培养基中添加活性炭和聚乙烯吡咯烷酮吸附分泌的有害物质和抑制褐变物质产生。采用本方法，可将西番莲顶梢初诱导污染率、褐化率控制在10%以下；顶梢初诱导成活率达90%以上，丛生芽继代增殖系数5.0以上，生根率90%以上；瓶苗移栽成活率达95.0%以上。本发明能满足工厂化育苗的需要。

主权项

1.一种紫果西番莲顶梢的组培育苗方法，其特征包含以下步骤：（1）外植体消毒：采集刚萌发3～5d的紫果西番莲未展叶幼嫩顶梢做外植体；冲洗干净后，用4500 mg.L‑1维生素C+1000 mg.L‑1柠檬酸蒸馏水溶液浸泡45min，然后用2500 mg.L‑1高锰酸钾蒸馏水溶液浸泡30min，用蒸馏水冲洗3～5次，再用1000 mg.L‑1氯化汞水溶液常规消毒6min，蒸馏水冲洗5次；（2）基本培养基的确定：植物细胞组织培养各阶段的基本培养基均为：1/2MS+12 g.L‑1琼脂+30 g.L‑1蔗糖，pH值5.5；各阶段培养条件为：温度24℃～26℃，光照强度为1500～2000Lux，光照时间为12～14h/d；（3）腋芽初诱导培养：将消毒后的外植体按生长极性竖立接种，诱导腋芽萌发新叶；培养20d后，萌发2～3片新叶；培养基配方：基本培养基+1.2g.L‑1活性炭+1.2 g.L‑1聚乙烯吡咯烷酮+0.5mg.L‑1 噻苯隆+0.05 mg.L‑1萘乙酸；（4）愈伤组织培养：将初诱导培养产生的叶片剪成面积1cm2小块后接种，诱导愈伤组织分化；培养35d后，产生直径1.6cm的绿色疏松愈伤组织；培养基配方：基本培养基+1.2g.L‑1活性炭+1.2g.L‑1 聚乙烯吡咯烷酮 +1.2 mg.L‑1 噻苯隆+0.1mg.L‑1萘乙酸；（5）继代增殖培养：用镊子轻轻将愈伤组织分成直径0.5cm的小块后接种，诱导丛生芽分化；培养40d后，愈伤组织分化出5‑7个丛生芽；培养基配方：基本培养基+1.2g.L‑1活性炭+1.2g.L‑1 聚乙烯吡咯烷酮+1.5 mg.L‑1 噻苯隆+0.03mg.L‑1萘乙酸；（6）生根诱导培养：将继代增殖形成的丛生芽剪切单芽后接种于的生根培养基上，诱导生根;培养35d后，90%产生根系，每株5～10根，根长0.5～3.0cm;培养基配方：基本培养基+0.1mg.L‑1 6‑卞氨基嘌呤+1.2 mg.L‑1 吲哚丁酸；（7）瓶苗移栽：将生根培养35d，苗高8cm以上瓶苗揭开瓶盖，每瓶加入20ml蒸馏水，在温度24℃～26℃的培养室炼苗培养10d；准备基质后进行幼苗移栽；同时进行苗床遮阴，移栽1个月后检查，成活率95%以上。