[发明专利]一种DHAV-3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒及其应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒，用于鸭甲肝病毒3型(DHAV‑3)抗体的快速检测。本发明所述鸭甲肝病毒3型多肽间接ELISA检测试剂盒，以合成的多肽W7为包被抗原，其对于DHAV‑3抗体的特异性高，安全性好，且不含无关杂蛋白，只与DHAV‑3阳性血清特异结合，不与其它病毒的阳性血清发生交叉反应，具有良好的抗原性，使得本发明所述检测试剂盒具有很高的特异性和敏感性。

主权项

1.一种DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，包括以DHAV‑3型合成多肽W7包被的ELISA板；所述合成多肽W7包括如N‑SRNHRPFRFCLRLKT‑CooH所示的氨基酸序列结构。

2.根据权利要求1所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述合成多肽W7的氨基酸序列结构为N‑SRNHRPFRFCLRLKT‑CooH。

3.根据权利要求1或2所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述合成多肽W7包被的ELISA板的制备方法为：用pH9.6的0.05M碳酸盐缓冲液作包被液，将所述合成多肽W7稀释至浓度为1μg/mL，按100μL/孔剂量加入至ELISA反应板中，于37℃下作用2小时，并于4℃包被过夜，拍干后用Porcine skin Gelatin于37℃封闭2小时，以pH7.4、含浓度0.05％吐温‑20的PBS进行洗涤，拍干并待其干燥后装入含干燥剂的包装袋保存，备用。

4.根据权利要求1‑3任一项所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括样品稀释液、10×浓缩洗涤液、酶结合物工作液、显色液、终止液、阳性对照和阴性对照。

5.根据权利要求4所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

6.根据权利要求4或5所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：

所述样品稀释液为含浓度0.05％吐温‑20的0.01M的磷酸盐缓冲液，pH7.4；

所述10×浓缩洗液为含浓度0.5％吐温‑20的0.1M的磷酸盐缓冲液，pH7.4；

所述酶结合物工作液为HRP‑羊抗鸭IgG；

所述显色液为体积比1：1的浓度0.2mg/mL四甲基联苯胺(TMB)溶液和含浓度0.5‰过氧化氢尿素的柠檬酸‑磷酸盐缓冲液的混合液；

所述终止液为浓度0.31％氢氟酸溶液；

所述阳性对照为经筛选获得的DHAV‑3阳性血清，其OD_650nm≥1.0，并加入1000U/mL的青链霉素；

所述阴性对照为经筛选获得的阴性血清，其OD_650nm≤0.25，并加入1000U/mL的青链霉素。

7.权利要求1‑6任一项所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括将待检血清加入至所述合成多肽W7包被的ELISA板的步骤。

8.权利要求7所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒的使用方法，其特征在于，具体包括：将待检血清用所述样品稀释液按1：100比例进行稀释，随后按100μL/孔剂量加入至所述ELISA板中，同时设阴性对照及阳性对照，于37℃孵育45min；反应结束后，弃去反应孔中的液体，每孔加洗涤液350μL，洗涤3‑5次，每次间隔1min，拍干；随后每孔加100μL所述酶结合物工作液，于37℃孵育45min；随后加洗涤液洗涤3‑5次，每次间隔1min，拍干；并依次加入100μL显色液，于37℃避光孵育15min，并加50μL终止液终止反应，用酶标仪在650nm波长下测定各孔吸光度A值，读值计算并判定结果。

9.权利要求1‑6任一项所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒在DHAV‑3抗体的检测领域中的应用。

10.一种快速检测DHAV‑3抗体的方法，其特征在于，包括以权利要求1‑6任一项所述的DHAV‑3型多肽间接ELISA抗体检测试剂盒对待测血清进行检测的步骤；其检测样本的判定标准为：当待检样本OD_650nm值与阴性对照OD650nm值的比值(P/N)大于或等于2.1，且待检样本OD_650nm值大于0.280判为阳性。