[发明专利]通过考察候选肽段的酶解稳定性筛选出奶粉过敏蛋白的特征肽段的方法

摘要

本发明公开了通过考察候选肽段的酶解稳定性筛选出奶粉过敏蛋白的特征肽段的方法，具体涉及食品检测领域，该方法包括如下步骤：在样本溶液中依次加入三乙基碳酸氢铵缓冲液和二硫苏糖醇，并加入碘代乙酰胺，反应后得到待酶解样本溶液，且通过酶解得到酶解溶液。酶解溶液采用二甲基标记得到轻标溶液和重标溶液。将轻标溶液与重标溶液按质量比为1:1混合，采用纳流液相色谱串联Q‑Exactive高分辨质谱鉴别得到候选肽段。采用超高性能液相色谱串联三重四级杆对可识别的质谱信息所对应的候选肽段进行相对定量分析，筛选出峰面积比的相对标准偏差<10％的候选肽段，即得到特征肽段。本发明具有可筛选出性能最优的特征肽段的优点。

主权项

1.通过考察候选肽段的酶解稳定性筛选出奶粉过敏蛋白的特征肽段的方法，其特征在于，包括如下步骤：S01、将样本奶粉溶解在溶剂中，得到样本溶液；S02、根据不同种类的样本奶粉所对应的过敏源信息筛选过敏蛋白；S03、(1)在所述的样本溶液中依次加入三乙基碳酸氢铵缓冲液和二硫苏糖醇，反应完成后，加入碘代乙酰胺，并放置于暗处或遮光反应，得到待酶解样本溶液；(2)于待酶解样本溶液中加入蛋白酶，酶解反应完成后，即得到酶解溶液；S04、在酶解溶液中，分别依次加入体积分数为4％的CH2O溶液和浓度为0.6mol/L的氰基硼氰化钠溶液，充分反应后，分别依次加入160μL体积分数为1％的氨水溶液与80μL体积分数为5％的甲酸溶液，反应完成后，得到二甲基标记完成的轻标溶液；S05、在酶解溶液中，分别依次加入体积分数为4％的13CD2O溶液和浓度为0.6mol/L的氰基硼氰化钠溶液，充分反应后，分别依次加入160μL体积分数为1％的氨水溶液与80μL体积分数为5％的甲酸溶液，反应完成后，得到二甲基标记完成的重标溶液，即得到内标溶液；S06、将所述轻标溶液与所述的内标溶液按体积比为1:1均匀混合，并采用纳流液相色谱串联Q‑Exactive高分辨质谱配合相关蛋白质组学软件鉴别得到候选肽段，并保留所述的候选肽段的质谱信息；S07、应用蛋白质组学软件将所述的质谱信息导入三重四级杆质谱仪中，建立相关多反应检测方程，得到可成功转化的候选肽段的质谱信息；采用超高性能液相色谱串联三重四级杆对所述的质谱信息进行多次平行相对定量分析，并考察每条候选肽段的平均峰面积与相应候选肽段峰面积比的相对标准偏差之间的关系，筛选留下相对标准偏差<10％的候选肽段，得到特征肽段。