[发明专利]一种优质高产三七的鉴定方法在审
| 申请号： | 201810224481.2 | 申请日： | 2018-03-19 |
| 公开（公告）号： | CN108277262A | 公开（公告）日： | 2018-07-13 |
| 发明（设计）人： | 郑云;李世鹏;廖沛然;崔秀明 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 650093 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于荧光定量PCR实验鉴定优质高产三七的方法，包括以下步骤：(1)待测三七根样品总RNA提取；(2)三七根样品的miRNAcDNA第一链合成；(3)三七根样品的RNAcDNA第一链合成；(4)以RNA和miRNA的cDNA第一链为模板，用特异性引物和试剂盒，进行荧光定量PCR检测，根据实时荧光定量PCR检测结果，采用相对定量解析方法，即2‑△△Ct进行判断，即：(1)miR156g‑5p的实时荧光PCR结果即2‑△△Ct高于6.396；或(2)靶基因SPL 5的实时荧光PCR结果即2‑△△Ct低于0.046，则待检测样品为优质高产三七植株。采用本发明所提出的方法能对高产三七进行快速鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 三七根 高产 实时荧光PCR 第一链 合成 实时荧光定量PCR 荧光定量PCR检测 荧光定量PCR 待检测样品 特异性引物 总RNA提取 检测结果 快速鉴定 实验鉴定 相对定量 植株 靶基因 试剂盒 解析 | ||
【主权项】：
1.一种优质高产三七的鉴定方法，包括如下步骤：(1)待检测三七根样品总RNA提取；(2)将待检测样品总RNA中的miRNA反转录成cDNA，并合成第一链，用于miRNA实时荧光PCR分析；(3)将待检测样品RNA反转录成cDNA第一链，用于靶基因实时荧光PCR分析；(4)以RNA cDNA第一链和miRNA cDNA第一链为模板，用特异性引物和试剂盒进行荧光定量PCR检测；以PnACT2为三七的内参基因，是SPL5的对照组；以5.8S ribosomal RNA为miR156g‑5p的对照组；(5)根据实时荧光定量PCR检测结果进行判断；其特征在于，步骤(2)中所述miRNA为miR156g‑5p，步骤(3)中所述RNA为SPL5，步骤(4)中所述特异性引物如下表所示：![]()
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