[发明专利]基于PCR的无缝构建小RNA表达载体的方法有效
申请号: | 201810241433.4 | 申请日: | 2018-03-22 |
公开(公告)号: | CN108251444B | 公开(公告)日: | 2022-09-27 |
发明(设计)人: | 柳素玲;周磊;盛丹丹 | 申请(专利权)人: | 复旦大学附属肿瘤医院 |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/113 |
代理公司: | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人: | 崔佳佳;徐迅 |
地址: | 200032 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明提供了一种基于PCR的无缝构建小RNA表达载体的方法。具体地,本发明的方法包括步骤:(1)提供目的载体和用于扩增的第一引物和第二引物,其中第一引物为正向引物而第二引物为反向引物,所述的目的载体是环化的载体;(2)以所述目的载体为模板,用所述第一引物和第二引物,在聚合酶存在下进行扩增反应,从而获得扩增产物;(3)在无缝克隆重组酶作用下,对扩增产物进行环化反应,从而形成环化的表达载体,即为用于表达小RNA的表达载体。本发明的方法大大简化shRNA、sgRNA和crRNA等常用小RNA表达载体克隆过程,节省实验者的时间,降低劳动量,提高成功率,降低构建成本。 | ||
搜索关键词: | 基于 pcr 无缝 构建 rna 表达 载体 方法 | ||
【主权项】:
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