[发明专利]高血压基因多态性荧光PCR溶解曲线检测试剂盒及应用

摘要

本发明涉及一种高血压基因多态性荧光PCR溶解曲线检测试剂盒，及其应用，以及一种检测高血压用药基因的多重PCR熔解曲线检测方法。所述试剂盒主要包括引物组合、探针组合，以及热启动聚合酶、PCR反应缓冲液、dNTPs等PCR反应试剂，含高血压用药相关7种基因多态性检测，分别是CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB1(1165G>C)、AGTR1(1166A>C)、CYP3A5*3、NPPA(T2238C)、ACE(I/D)，通过3个反应液进行PCR扩增和熔解分析，判断7个基因相关多态性的情况，从而指导临床高血压5大类药物的个性化应用。本发明通过3个反应管轻松完成检测过程，同时检测过程无需核酸提取过程，简化操作步骤，判读方法简单。

主权项

1.一种高血压基因多态性荧光PCR溶解曲线检测试剂盒，主要包括三组引物对和PCR反应试剂，其特征在于，所述引物序列如下：引物探针组一为CYP3A5*3和NPPA引物：CYP3A5*3引物探针序列如下：上游引物：5’‑TAATGAAGTATTTTAAACATATA‑3’下游引物：5’‑GTTCTAGTTCATTAGGGTGTGACAC‑3’荧光探针：FAM‑TTTGTCTTTCAATATCTC‑BQ1；NPPA引物探针序列如下：上游引物：5’‑GATGGGATGATCACAAC‑3’下游引物：5’‑CCAGGTCACCAAGCCAGATA‑3’荧光探针：HEX‑TGTTATCTTCAGTAC‑BQ2；引物探针组二为AGTR1、CYP2C9*3和ACE(I/D)引物：AGTR1引物探针序列如下：上游引物：5’‑TTCTAAAATATATTCCCC‑3’下游引物：5’‑GAAAAGTCGGTTCAGTCCACATAAT‑3’荧光探针：FAM‑CCAAATGAGCATTAGCT‑BQ1；CYP2C9*3引物探针序列如下：上游引物：5’–AGAGATTGAACGTGTGATTGGCA‑3’下游引物：5’‑TGATACTATGAATTTGGGGACTTCG‑3’荧光探针：HEX‑GAGATACATTGACC‑BQ2；ACE(I/D)引物探针序列如下：上游引物：5’‑TCCCATCCTTTCTCCCATTTCTCTA‑3’下游引物：5’‑CCCTTAGCTCACCTCTGCTTGTA‑3’荧光探针：CY5‑GCTGCCTATACAGTCACT‑BQ2；引物探针组三为ADRB1和CYP2D6*10引物：ADRB1引物探针序列如下：上游引物：5’‑CCCATCATCTACTGCCGCAGC‑3’下游引物：5’‑TCTCCGTGGGTCGCGTG‑3’荧光探针：FAM‑CTTCCAGGGACTGCTCT‑BQ1；CYP2D6*10引物探针序列如下：上游引物：5’‑CCCATTTGGTAGTGAGGCAGGT‑3’下游引物：5’‑GACCTGATGCACCGGCG‑3’荧光探针：HEX‑GCACGCTACCCACCAGG‑BQ2。