[发明专利]一种CaSR在RV、NSP4感染后的表达水平分析方法

摘要

本发明公开了一种CaSR在RV、NSP4感染后的表达水平分析方法，其包括以下步骤：a、病毒株的培养与扩增：RV‑Wa株与SA‑11病毒株的培养与扩增均在猴胚胎肾细胞上进行；b、制备GST‑NSP4T融合蛋白；c、构建RV腹泻模型以及NSP4腹泻模型；d、体重、体征、腹泻程度观察及粪便RV含量测定；e、动物取材；f、相关指标检测：在RV感染后每时间点取各肠段石蜡切片HE染色，光镜观察形态学改变、TUNEL荧光显色法原位检测肠上皮细胞凋亡。本发明能够有效地揭示钙敏感受体CaSR在RV、NSP4感染中的表达状态，以明确RV感染与CaSR表达变化的相关性。

主权项

1.一种CaSR在RV、NSP4感染后的表达水平分析方法，其特征在于，包括有以下步骤，具体的：a、病毒株的培养与扩增：RV‑Wa株与SA‑11病毒株的培养与扩增均在猴胚胎肾细胞上进行；b、制备GST‑NSP4T融合蛋白；c、构建RV腹泻模型以及NSP4腹泻模型：动物接种病毒及给药，空白组灌胃DMEM培养液，200µl/只；RV组灌胃SA‑11株200µl/只，NSP4T组腹腔注射重组融合蛋白GST‑NSP4T，200µl/只，乳鼠灌胃后与母鼠同笼，母乳喂养；1dpi后，腹泻乳鼠分别灌胃给药，RV组、NSP4T病毒对照组及空白组灌胃DMEM培养液200µl/只，每天三次，连续5天；d、体重、体征、腹泻程度观察及粪便RV含量测定；e、动物取材：在给药后第1、2、3、4、5天相同时间点处死乳鼠，且每组3只，取每只乳鼠小肠、大肠组织，经PBS冲洗后放入含RNAlater溶液中浸泡24h，装入灭活RNA酶的冻存管内，于液氮冷冻并于‑80℃保存，以用于分子生物学检测；一份10%甲醛固定，供免疫组织化学及常规HE染色；f、相关指标检测：在RV感染后每时间点取各肠段石蜡切片HE染色，光镜观察形态学改变、TUNEL荧光显色法原位检测肠上皮细胞凋亡。