[发明专利]CRISPR-Cas9靶向敲除人细胞SANIL1基因及其特异性的sgRNA在审
申请号: | 201810259431.8 | 申请日: | 2018-03-27 |
公开(公告)号: | CN108410877A | 公开(公告)日: | 2018-08-17 |
发明(设计)人: | 杨蕊菊;陆路;杨兴林;潘讴东 | 申请(专利权)人: | 和元生物技术(上海)股份有限公司 |
主分类号: | C12N15/113 | 分类号: | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/90;C12N5/10 |
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地址: | 201321 上海市浦东*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | 本发明公开了CRISPR/Cas9靶向敲除人细胞SANIL1基因及其特异性sgRNA。首先是获得特异性靶向SANIL1基因外显子的sgRNA,其碱基序列如SEQ ID NO.1所示;其次是构建SANIL1基因的sgRNA到病毒载体系统,该系统含有Cas9蛋白;最后将含有该sgRNA的CRISPR/Cas9病毒感染人细胞,获得SANIL1蛋白表达水平显著降低的细胞株。本发明具有操作步骤简单、sgRNA靶向性好、且对SANIL1基因切割效率高;此外,所构建的CRISPR/Cas9慢病毒系统具有敲除效率高的优势,并能特异性敲除SANIL1基因,得到敲除SANIL1基因的人细胞,从而为进一步研究人细胞中SANIL1的作用机制提供强有力的工具。 | ||
搜索关键词: | 人细胞 敲除 基因 靶向 构建 病毒载体系统 蛋白表达水平 基因外显子 特异性靶向 病毒感染 碱基序列 切割效率 作用机制 靶向性 慢病毒 细胞株 蛋白 研究 | ||
【主权项】:
1.一种CRISPR/Cas9 靶向敲除SANIL1基因及其特异性的sgRNA,其特征在于,首先设计获得特异性靶向SANIL1 基因外显子的sgRNA;其次构建SANIL1基因的sgRNA到病毒载体系统,然后将此质粒或者病毒载体系统转染或者感染人细胞,得到的SANIL1基因敲除细胞株。
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