[发明专利]CRISPR/Cas9技术介导山羊VEGF基因定点整合的方法在审
| 申请号： | 201810266144.X | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108424931A | 公开（公告）日： | 2018-08-21 |
| 发明（设计）人： | 呼啸;刘东军;郝斐;高源;梁浩 | 申请（专利权）人： | 内蒙古大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/877;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 010021 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明利用CRISPER/Cas9系统介导完成山羊VEGF基因定点整合，其是依据山羊的FGF5基因序列，构建基于CRISPER/Cas9系统的Cas9‑gRNA表达载体及VEGF打靶载体；然后将优化后的Cas9‑gRNA表达载体及VEGF打靶载体共同转染至山羊胎儿成纤维细胞中，获得VEGF基因在FGF5位点定点整合的细胞株。本发明所构建的基于CRISPER/Cas9系统的打靶载体为山羊VEGF基因定点整合及FGF5基因靶向敲除提供了一种简单快捷安全的途径。该方法在细胞株筛选过程中没有涉及任何筛选标记基因，从而大大提高了转基因动物的安全性，对山羊的遗传育种以及基因功能的研究具有重要价值。 | ||
| 搜索关键词： | 山羊 定点整合 打靶载体 表达载体 细胞株 构建 介导 胎儿成纤维细胞 筛选标记基因 转基因动物 基因靶向 基因功能 基因序列 遗传育种 敲除 位点 转染 筛选 优化 安全 研究 | ||
【主权项】：
1.CRISPR/Cas9技术介导山羊VEGF基因定点整合的方法，其特征在于，其是根据山羊的FGF5基因序列，构建基于CRISPER/Cas9系统的Cas9‑gRNA表达载体和VEGF打靶载体，然后将优化后的然后将优化后的Cas9‑gRNA表达载体及VEGF打靶载体共同转染至山羊胎儿成纤维细胞中，获得VEGF基因在FGF5位点定点整合的细胞株。
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