[发明专利]一种异枝江蓠原生质体的制备方法有效
| 申请号： | 201810270100.4 | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108660105B | 公开（公告）日： | 2020-06-16 |
| 发明（设计）人： | 刘涛;金月梅;刘翠;池姗 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 张黎 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： |
本发明公开了一种异枝江蓠原生质体的制备方法，具体步骤为：(1)材料的预处理；(2)配制消化用酶液；(3)将步骤(1)中得到的材料加入步骤(2)配制好的消化用酶液中，放入25‑30℃的恒温摇床上进行黑暗酶解，反应2‑3h后，得到酶解液；(4)将步骤(3)中得到的酶解液用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水进行冲洗离心，制得异枝江蓠原生质体。本发明提供的异枝江蓠原生质体的制备方法简单，原生质体生产效率高，用本发明自制的消化用酶液酶解异枝江蓠可获得较高密度的原生质体，每克材料可获得7.7×10 |
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| 搜索关键词： | 一种 枝江 原生 质体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种异枝江蓠原生质体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)首先，挑选幼嫩且活力旺盛的藻体，清洗干净后用0.5g/L I2‑IK溶液浸泡10s，后用大量的消毒海水进行冲洗，并放入消毒海水中暂养后，取出藻体，吸水纸将藻体上水分吸干后用解剖刀将藻体切碎，得到材料；(2)配制消化用酶液；(3)将步骤(1)中得到的材料加入步骤(2)配制好的消化用酶液中，所述材料与消化用酶液的质量体积比为1g/10mL，放入25‑30℃的恒温摇床上进行黑暗酶解，每30min镜检一次，观察并拍照，反应2‑3h后，得到酶解液；(4)用筛绢对步骤(3)中得到的酶解液进行过滤，去除未消化的细胞、细胞团和碎片，取上清液进行离心处理，使单细胞原生质体下沉，细胞碎片留在上清液中，弃去上清液，用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水进行冲洗离心2‑3次，收集沉淀后用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水悬浮至1mL，制得异枝江蓠原生质体。
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