[发明专利]一种同时测定柑橘果实中22种黄酮和酚酸类物质的方法

摘要

本发明公开了一种采用高效液相色谱‑二极管阵列检测器‑荧光检测器（HPLC‑DAD‑FLD）测定柑橘果实中22种黄酮和酚酸类物质的方法，其能够同时测定柑橘样品中没食子酸、辛弗林、绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、对香豆酸、牡荊素鼠李糖苷、圣次草苷、阿魏酸、芦丁、苯甲酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、地奥司明、新橙皮苷、槲皮素、柚皮素、山奈酚、川陈皮素、桔皮素、金合欢素等22种酚类化合物，不需要衍生化，且准确度高、灵敏度高、重复性好。

主权项

1.一种同时测定柑橘果实中22种黄酮和酚酸类物质的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）样品溶液的制备：称取10个柑橘果实，将果皮或果肉干燥后粉碎，过60目筛；称取0.1~0.5g，加入20mL、50wt.%甲醇溶液超声提取20min，离心分离；重复提取两次后，合并上清，加50wt.%甲醇溶液定容至50mL，8000rpm/min离心，上清液经0.22μm有机滤膜过滤，得样品溶液；2）混合标样的配制：将没食子酸、辛弗林、绿原酸、原儿茶酸、咖啡酸、对香豆酸、牡荊素鼠李糖苷、圣次草苷、阿魏酸、芦丁、苯甲酸、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、地奥司明、新橙皮苷、槲皮素、柚皮素、山奈酚、川陈皮素、桔皮素、金合欢素的标准品分别用50wt.%甲醇溶液配制成1mg/mL的标准液，经稀释、混合，得混合标样，于‑20℃保存备用；3）色谱检测：使用由四元泵、柱温箱、DAD检测器、荧光检测器以及工作站所组成的HPLC色谱体系进行检测；其检测条件为：采用C18色谱柱，柱温为30℃，进样量为5‑20μL，以乙腈‑0.5wt.%乙酸溶液为流动相进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为0‑83min乙腈与0.5wt.%乙酸溶液的体积比由13:87增加至60:40，流动相流速为0.8mL/min，检测时间为83min；DAD检测波长为280nm，荧光检测Ex=261~340nm、Em=345~450nm。