[发明专利]一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法

摘要

本发明公开了一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，包括以下步骤：S1、提取目的蛋白及电泳：提取目标蛋白样品，制备凝胶，进行电泳；S2、转膜：电泳结束后切下目的蛋白凝胶，按照滤纸、PVDF膜、胶、滤纸由下往上顺序排列，放入半干转膜仪中恒压25V、转印40min；S3、封闭：转膜结束后加入适量封闭液室温振摇孵育30min；S4、抗体孵育：加入稀释后的一抗室温振摇孵育2h，加入稀释后的二抗室温孵育1h；S5、显色：放入凝胶成像仪器中采集信号。本发明针对肿瘤耐药性相关蛋白P‑糖蛋白采用半干转转膜方法，可以节省缓冲液和时间；采用室温静置进行变性处理检测效果更好；采用的一抗和二抗稀释比例能获得较好的蛋白检测信号。

主权项

1.一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、提取目的蛋白及电泳：提取肿瘤组织标本中的肿瘤耐药性相关蛋白样品，测定蛋白浓度后分装于液氮中保存，制备SDS‑PAGE凝胶，按15μL体系将6倍SDS上样缓冲液与20μg蛋白样品混合后，再与预染指示剂一同上样，加入1倍Tris‑SDS‑PAGE电泳缓冲液，进行电泳；S2、转膜：电泳结束后，将目的蛋白所在位置凝胶切下，剪取PVDF膜，按照滤纸、PVDF膜、胶、滤纸由下往上顺序排列，赶走多余气泡，放入半干转膜仪中恒压25V、转印40min；S3、封闭：转膜结束后加入适量封闭液室温振摇孵育30min；S4、抗体孵育：加入稀释后的一抗室温振摇孵育2h，洗涤液洗去未结合的抗体；加入稀释后的二抗室温孵育1h，洗涤液洗去未结合的抗体；S5、显色：加入1ml超敏发光液室温反应30s，放入凝胶成像仪器中采集信号，观察蛋白的表达。