[发明专利]一种牙鲆卵原细胞分离纯化方法有效
| 申请号： | 201810283741.3 | 申请日： | 2018-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN108265026B | 公开（公告）日： | 2020-12-22 |
| 发明（设计）人： | 任玉芹;孙朝徽;王玉芬;于清海;周勤;宋立民;姜秀凤;王青林;司飞 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院北戴河中心实验站 |
| 主分类号： | C12N5/075 | 分类号： | C12N5/075 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 钱学宇 |
| 地址： | 066199 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种牙鲆卵原细胞分离纯化方法，包括：1).将牙鲆雌鱼性腺组织剥去白膜剪碎、离心后得到的沉淀用组合酶液消化，所得细胞消化液经细胞筛网过滤、离心后重悬得到细胞悬液；其中，所述组合酶液中含有胰蛋白酶以及DNA酶Ⅰ；2).将生理渗透压的Percoll液配制成不同浓度梯度，用制备好的每级Percoll梯度液按照密度从高到低逐层轻轻沿着管壁流入离心管中制备成Percoll梯度液，将所述细胞悬液置于梯度最上层；离心后吸取最上面两层的细胞带得到牙鲆卵原细胞。本发明所提供的方法易于操作，整个操作可控，采用上述方法能够成功分离出牙鲆卵原细胞，卵原细胞占比在80％以上，纯化前后卵原细胞的数量损失不大。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 牙鲆卵原 细胞 分离 纯化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种牙鲆卵原细胞分离纯化方法，包括：1).将牙鲆雌鱼性腺组织剥去白膜剪碎、离心后得到的沉淀用组合酶液消化，所得细胞消化液经细胞筛网过滤、离心后重悬得到细胞悬液；其中，所述组合酶液中含有0.20％～0.30％胰蛋白酶以及0.050％～0.060％DNA酶Ⅰ；2).将生理渗透压的Percoll液配制成15％～25％、30％～40％、45％～55％浓度梯度，用制备好的每级Percoll梯度液按照密度从高到低逐层轻轻沿着管壁流入离心管中制备成Percoll梯度液，将所述细胞悬液置于梯度最上层，每层梯度及所述细胞悬液的量均为1.4ml～2.5ml；180G～220G离心20min～40min后，吸取最上面两层的细胞带得到牙鲆卵原细胞。
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