[发明专利]一种基于过渡金属纳米材料特异性还原细胞色素c的方法

摘要

一种基于过渡金属纳米材料特异性还原细胞色素c(Cyt c)的方法，属于纳米材料与生物检测技术领域，传统的和生物学的Cyt c还原和纯化方法是交换层析，它需要用还原剂(连二亚硫酸钠)将还原的Cyt c与几个洗脱步骤分离，而本发明所述方法非常简单。本发明还提供了一种基于过渡金属纳米材料还原Cyt c‑心磷脂脂质体混合物中Cyt c的方法，在本发明中与心磷脂脂质体结合的Cyt c过氧化物酶活性与氧化还原状态的关系首次借助镍纳米材料揭示；本发明还提供了一种基于过渡金属纳米材料检测线粒体中的细胞色素c的方法，通过简单易操作的实验过程来检测线粒体中的细胞色素c。

主权项

1.一种基于过渡金属纳米材料特异性还原细胞色素c的方法，其步骤如下：①将六水合氯化镍或氯化钴以乙二醇作为溶剂，制成浓度为0.05～0.2mol/L的氯化镍或氯化钴的乙二醇溶液；②向1.0～1.2g氢氧化钠固体中加入30～40mL乙二醇，磁力搅拌30～60分钟，得到氢氧化钠的乙二醇溶液；③在步骤②得到的氢氧化钠的乙二醇溶液中加入10～20mL、质量分数为70％～80％的水合肼水溶液，搅拌至获得均匀的溶液；④将步骤③得到的溶液在磁场中加热至70～90℃后，将5～10mL步骤①得到的氯化镍或氯化钴的乙二醇溶液逐滴加入其中，继续搅拌10～20min，在溶液中得到黑色固体；⑤将步骤④得到的黑色固体产物用磁铁取出后，用去离子水和乙醇洗涤，然后在50～80℃下干燥10～20小时，得到Ni纳米材料或Co纳米材料；⑥称取细胞色素c，溶解于pH＝7.0～7.3的磷酸缓冲溶液中，制成100～200μmol/L细胞色素c的溶液，利用紫外可见近红外分光光度计进行检测，得到该溶液的吸光度曲线；⑦称取0.0020～0.0030g Ni纳米材料或Co纳米材料，与150～200μL步骤⑥制得的细胞色素c的溶液混合后，搅拌10～15分钟；⑧待细胞色素c溶液变色后，用磁铁将Ni纳米粒子或Co纳米粒子吸附在混合溶液底部，将上层溶液取出，然后利用紫外可见近红外分光光度计进行检测，得到该溶液的吸光度曲线；通过对比步骤⑥和本步骤得到的吸光度曲线可以看到，曲线的特征峰位发生了红移，从而表明细胞色素c已被Ni纳米材料或Co纳米材料还原。