[发明专利]抗生素对果蝇记忆认知影响用测定方法

摘要

本发明涉及生物工程领域，具体是一种抗生素对果蝇记忆认知影响用测定方法，包括步骤：A、选择测试对象，B、设定抗生素的给药时间和给药浓度，C、选定训练方法，对B步骤中各组存活的果蝇对应的采用气味、电击训练，D、选定影响评价方法，E、确定抗生素对记忆认知影响的量值。本发明利用果蝇探索常用抗生素对寿命的影响；用果蝇的嗅觉学习记忆范式检测抗生素对于果蝇学习能力、记忆能力和记忆灵活性的多角度评价，并间接的揭示认知功能改变的分子机制，为抗生素对果蝇记忆认知具有影响提供了依据，从而推导出抗生素对人体大脑记忆认知具有影响提供了依据。

主权项

1.一种抗生素对果蝇记忆认知影响用测定方法，包括如下步骤：A、选择测试对象，选择活体果蝇若干只；B、设定抗生素的给药时间和给药浓度，以果蝇给药后的存活率为评价原则；具体是将果蝇分组，预留参照组不给药；其余各组区分不同种类抗生素和不同给药浓度，观察在给药后不同时间之后果蝇的存活率，并进行记录；所述存活率为给药之后达到设定条件后果蝇存活数量与给药之前果蝇总数量比值的百分比；C、选定训练方法，对B步骤中各组存活的果蝇对应的采用气味、电击训练，学习能力和记忆能力测试按照果蝇巴普洛夫嗅觉学习记忆检测方法进行测试，具体是将果蝇装入带有可导电铜网的训练管中，按照先后顺序通入至少两种明显有区别气味的气体，在通入相邻两种不同气味气体之间要通入设定时间的空气；以训练管通入两种不同气味气体为例，在通第一个气味时，训练管的铜网通电，果蝇被电击；在通入第二个气味时，铜网不通电，在训练之后立即测试果蝇对两种气味的选择计算得出果蝇的学习能力，在训练60分钟之后测试果蝇对两种气味的选择计算得出果蝇的记忆能力；运用灵活性测试时采用反转训练方法，在反转训练中包括两个连续的单次训练模块，在第一个模块中气味1伴随电击，而气味2不伴随电击，该模块的训练会使果蝇产生对于气味1逃避的记忆；紧接着的第二个模块中气味2伴随电击，而气味1不伴随电击，该模块应使果蝇产生逃避气味2的趋向；D、选定影响评价方法，选用蛋白印记法，将C步骤中各组给药后设定时间的果蝇放入液氮预冷的离心试管中置入液氮罐中20秒，随后取出离心试管，震荡离心试管后将其倒入金属筛上提取果蝇大脑；按一定组分比例将果蝇大脑放入蛋白裂解液中，研磨，取上清液保存在低温冰箱中；采用生物学实验方法，测定参与学习功能的的蛋白PKC含量及其磷酸化水平，以及测定参与主动遗忘调节的小G蛋白Rac1及其激活态的Rac1‑GTP；E、确定抗生素对记忆认知影响的量值，采用数理统计方法对测定结果进行分析评价；当抗生素造成PKC磷酸化水平相比于对照组果蝇中PKC磷酸化水平在T检验中有显著性差异时评价为该抗生素对学习能力的影响是通过抑制了PKC磷酸化水平导致的；当抗生素造成Rac激活态水平与对照组果蝇中Rac激活态水平在T检验中具有显著性差异时，评价为该抗生素通过抑制主动遗忘达到延长60分钟记忆的效用。