[发明专利]一种检测晚期糖基化终末产物的方法和应用

摘要

本发明公开了一种检测晚期糖基化终末产物的方法和应用。所述方法首先制备石墨烯‑壳聚糖/N(ε)羧甲基赖氨酸修饰的玻碳电极，然后基于戊糖素单克隆抗体能与多种晚期糖基化终末产物产生交叉免疫反应的原理，结合间接竞争法，可实现对包括N(ε)羧甲基赖氨酸、N(ε)羧乙基赖氨酸、戊糖素、丙酮醛咪唑啉酮和精氨嘧啶在内的五种晚期糖基化终末产物的多残留检测。本发明提供的检测方法解决了目前晚期糖基化终末产物检测方法只能检测单一物质的问题，并具有较高的灵敏度(检测限在0.06～0.1ng/mL之间)和较宽的线性范围(0.1～1000ng/mL)，操作简便，成本较低，完全适用于临床上人体AGEs检测的需要，具有重要的实际应用价值。

主权项

1.一种检测晚期糖基化终末产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)电化学免疫传感器的制备：首先在打磨并清洗过的玻碳电极表面滴涂石墨烯‑壳聚糖，晾干后在其表面滴涂N(ε)羧甲基赖氨酸溶液，再晾干后即得到所述的电化学免疫传感器；步骤2)标准溶液的配制：配制含有晚期糖基化终末产物的乙醇溶液作为标准溶液，将含有浓度为0的晚期糖基化终末产物的标准溶液作为空白标样；步骤3)工作曲线的建立：将步骤1)制备的电化学免疫传感器浸入含有戊糖素单克隆抗体和步骤2)制备的标准溶液的磷酸缓冲溶液中恒温孵育，孵育后用磷酸缓冲溶液冲洗电化学免疫传感器，然后将其置于5mmol/L二茂铁的乙腈溶液中进行差分脉冲伏安扫描，以孵育前后响应电流变化值ΔI对标准溶液中晚期糖基化终末产物浓度的对数值logC作图，得ΔI‑logC工作曲线，采用线性回归法获得ΔI‑logC线性回归方程；步骤4)晚期糖基化终末产物的测定：配置含有待测样品的乙醇溶液，按照与步骤3)相同的方法对所述电化学免疫传感器进行孵育和差分脉冲伏安扫描，记录响应电流变化值ΔIx，将其代入ΔI‑logC线性回归方程，即可得出待测样品中晚期糖基化终末产物的浓度。