[发明专利]一种基于19F-NMR技术快速检测利奥西呱与蛋白相互作用的方法

摘要

本发明提供了一种基于19F‑NMR技术快速检测利奥西呱与蛋白相互作用的方法。该方法利用检测了加入蛋白前后的化合物位移，并根据化学位移变化与蛋白浓度数量关系计算出结合常数和结合位点数，并利用位点竞争试剂检测利奥西呱结合位点。本发明优化了利奥西呱‑人血清白蛋白19F‑NMR参数，使利奥西呱19F信号响应较强，可用于后期研究利奥西呱与其他蛋白作用；改善了利奥西呱的溶剂比列，使其溶解度大大增强但对蛋白结构没有影响，可用于利奥西呱在亲水性溶剂中的实验；优化了拟合化学位移与浓度相关曲线的参数，可用于利奥西呱与其他蛋白相互作用的曲线拟合。

主权项

1.一种基于19F‑NMR技术快速检测化合物与蛋白相互作用的方法，包括步骤：1)将氘代DMSO重水按体积比1：2混合，以该溶剂溶解利奥西呱；配制利奥西呱‑人血清蛋白摩尔浓度比为1:0,1:0.02,1:0.11,1:0.44,1:0.66,1:1,1:1.33,1:2,1:3的混合溶液，以三氟乙酸定标，检测混合体系19F‑NMR谱，调节NMR参数；记录化学位移，利用以下公式计算结合常数和结合位点数：其中δt是实测化学位移，δc是游离配体化合物化学位移，δb是结合态化合物位移，K为结合常数，F是化合物浓度，B是蛋白浓度，n为结合位点数量；2)利用华法林和布洛芬为位点竞争试剂判断利奥西呱结合位点，配制摩尔浓度比为1:1的利奥西呱‑人血清蛋白溶液，以三氟乙酸定标，在该复合溶液中加入华法林溶液作为位点1竞争试剂，该复合溶液中加入布洛芬溶液作为位点2竞争试剂，检测其结合位点。