[发明专利]一种HBV中HBx蛋白核心区段的可溶化和纯化及单克隆抗体在审
| 申请号： | 201810308380.3 | 申请日： | 2018-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN110343714A | 公开（公告）日： | 2019-10-18 |
| 发明（设计）人： | 胡小健;祁祺;李龙;王森 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/02;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/14;C07K16/08 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 陆飞;陆尤 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体为一种HBV中HBx蛋白核心区段HBxΔNΔC的纯化方法和HBxΔNΔC单克隆抗体。本发明通过改变原有纯化方法中各种缓冲液的配方和纯化工艺，得到有活性的、稳定的、均一的、高纯度的、单体的HBxΔNΔC样品，便于进行标准化、大规模的生产和制备；利用得到的HBxΔNΔC进一步制备得到鼠源HBxΔNΔC单克隆抗体和可稳定表达鼠源HBxΔNΔC单抗的杂交瘤细胞株。本发明方法得到的HBxΔNΔC以及HBxΔNΔC单抗可作为科学研究试剂，鼠源HBxΔNΔC单抗还可作为乙型肝炎病毒HBV感染疾病的检测试剂，将鼠源HBxΔNΔC单抗进行人源化可得到人源化的HBxΔNΔC单抗，可作为科学研究试剂、HBV感染疾病的检测试剂和辅助治疗制剂。 | ||
| 搜索关键词： | 单抗 鼠源 单克隆抗体 核心区段 检测试剂 人源化 制备 乙型肝炎病毒HBV 科学研究 生物技术领域 杂交瘤细胞株 辅助治疗 感染疾病 稳定表达 高纯度 缓冲液 溶化 均一 配方 标准化 疾病 生产 | ||
【主权项】：
1.一种HBx蛋白核心区段HBxΔNΔC包涵体的可溶化和纯化方法，其特征在于，是将含HBxΔNΔC序列的质粒转化到大肠杆菌Rosetta菌株进行重组表达得到HBxΔNΔC包涵体，然后对该HBxΔNΔC包涵体进行可溶化与纯化，在这过程中不使用还原剂，使用pH 4.0‑5.0的偏酸性缓冲液，并添加1‑20 mM的氧化剂，得到有活性、稳定、均一、高纯度、主要以单体形式存在的HBxΔNΔC蛋白样品。
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