[发明专利]一种表达异戊烯基转移酶ComQ的基因工程菌的构建方法及应用

摘要

本发明涉及一种表达异戊烯基转移酶ComQ的基因工程菌的构建方法及应用，属于基因工程蛋白质工程技术领域。主要技术方案如下：设计异戊烯基转移酶ComQ的引物，扩增异戊烯基转移酶ComQ目的基因，酶切酶连法构建重组质粒，重组质粒的鉴定，化学转化法构建基因工程菌株。本发明为利用异戊烯基转移酶生物合成具有药理活性的各种芳香类化合物和异戊烯基化肽类化合物，构建了一株表达异戊烯基转移酶的基因工程菌株，并利用该基因工程菌进行大量表达并分离纯化异戊烯基转移酶。分离纯化得到的异戊烯基转移酶可将肽类化合物中的芳香基异戊烯基化，可用于芳香类化合物的异戊烯基化。

主权项

1.一种表达异戊烯基转移酶ComQ的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计异戊烯基转移酶ComQ的引物根据异戊烯基转移酶ComQ的碱基序列，以及载体pProEX‑HTa的多克隆酶切位点，设计上下游引物并引入酶切位点；(2)扩增异戊烯基转移酶ComQ目的基因以解淀粉芽孢杆菌基因组为模板，向体系中加入上下游引物、Taq DNA聚合酶及缓冲液，进行PCR反应，切胶回收PCR产物；(3)酶切酶连法构建重组质粒将PCR产物和pProEX‑HTa质粒用限制性内切酶进行双酶切，回收酶切产物，用连接酶将载体与目的基因连接得到重组质粒，用化学转化法将重组质粒转入大肠杆菌DH5α感受态细胞中，在含有氨苄霉素的LB固体培养基中过夜培养；(4)重组质粒的鉴定挑取步骤(3)中单菌落接种于含有氨苄霉素的LB培养基中，恒温震荡培养后提质粒，利用双酶切方法初步检测并将质粒进行测序；(5)化学转化法构建基因工程菌株将测序成功的重组质粒用化学转化法转入E.coli BL21感受态细胞中，涂布于含氨苄霉素的LB固体培养基上，过夜培养，挑取单菌落接种于含氨苄霉素的LB液体培养基中，恒温过夜培养后保存，即得表达异戊烯基转移酶ComQ的基因工程菌。