[发明专利]一种脑组织冰冻切片的制备方法在审
| 申请号： | 201810330147.5 | 申请日： | 2018-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN108572105A | 公开（公告）日： | 2018-09-25 |
| 发明（设计）人： | 刘小菊;陈丹;李宁;张美芝;高杰;王枭宇;王海娟 | 申请（专利权）人： | 山东中医药大学 |
| 主分类号： | G01N1/42 | 分类号： | G01N1/42;G01N1/30 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 张祥明 |
| 地址： | 250355 山东省*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种脑组织冰冻切片的制备方法，属于生物学、医学实验领域，包括以下步骤：(1)组织取材及固定脱水：将动物脑组织进行固定和梯度脱水；(2)冷冻预处理：用PBS溶液冲洗脑组织并拭干，修平脑组织，用锡箔纸包裹，于冰冻切片机快速制冷区域冰冻后移出，等待处理；(3)半包埋处理：将脑组织进行半包埋处理，静置1分钟；(4)冰冻切片：将样品托固定于切片机探头上，作连续冠状冰冻切片。(5)切片收集：将所需部位的切片收集于盛有冰冻保存液的6孔板内，切片于‑20℃长期保存。本发明采用半包埋处理脑组织，可避免包埋剂对脑组织的影响，切片完整齐全，无冰晶形成，免疫荧光染色良好。 | ||
| 搜索关键词： | 脑组织 冰冻切片 切片 包埋 制备 免疫荧光染色 预处理 冰冻切片机 动物脑组织 冰冻保存 冰晶形成 长期保存 快速制冷 梯度脱水 医学实验 包埋剂 切片机 锡箔纸 样品托 冰冻 冠状 后移 脱水 修平 生物学 冲洗 冷冻 取材 | ||
【主权项】：
1.一种脑组织冰冻切片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)组织取材及固定脱水：使用心脏灌流取脑法取出动物脑组织，使用多聚甲醛进行固定，然后利用10％、20％、30％蔗糖溶液进行梯度脱水；(2)冷冻预处理：将冰冻切片机和样品托提前预冷，用PBS溶液冲洗脑组织后用吸水纸拭干，修平脑组织，用锡箔纸包裹，放在冰冻切片机快速制冷区域冰冻，之后从快速制冷区域移出，等待处理；(3)半包埋处理：在样品托上浅涂一层包埋剂打底，厚度为1mm，当包埋剂开始变白时，厚涂一层包埋剂，厚度为3mm，将脑组织小心迅速放入包埋剂中，浅浅包裹脑组织底部，上述操作均在冰冻切片机中进行。(4)冰冻切片：将样品托固定于切片机探头上，作连续冠状冰冻切片；(5)切片收集：将所需部位的切片收集于盛有冰冻保存液的6孔板内，每孔依次放入切片，每一部位均可收集6套切片，切片于‑20℃长期保存。
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