[发明专利]一种小鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养在审
| 申请号： | 201810346826.1 | 申请日： | 2018-04-18 |
| 公开（公告）号： | CN110387350A | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214434 江苏省无锡市江阴市东*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种小鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养方法，包括以下步骤：（1）麻醉处死ICR小鼠；（2）取股骨和胫骨，置于75%酒精浸泡消毒；（3）PBS清洗3次，剪掉股骨和胫骨的骨骺端；（4）用10ml针管，吸取含双抗的培养基冲出骨髓；（5）用percoll分离液，密度梯度法离心，取中间白色层；（6）用PBS清洗两次；（7）检测细胞活性；（8）细胞计数；（9）细胞形态鉴定；（10）ELISA法检测；（11）RT‑PCR检测。本发明提供的一种小鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养方法，操作简单，所得细胞数量多，成活率高，是一种理想的小鼠骨髓间充质干细胞分离与培养方法，为实验提供可靠的细胞资源。 | ||
| 搜索关键词： | 间充质干细胞 小鼠骨髓 股骨 细胞 胫骨 密度梯度法 酒精浸泡 细胞活性 细胞形态 培养基 白色层 检测 双抗 针管 成活率 骨髓 麻醉 消毒 | ||
【主权项】：
1.一种小鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养方法，其特征在于，包括以下步骤：腹腔注射肝素、再注射戊巴比妥钠麻醉处死ICR小鼠；（2）将小鼠后腹面向上固定于板上，无菌条件下取股骨和胫骨，置于75%酒精浸泡消毒；（3）无菌操作台内，PBS清洗3次，剪掉股骨和胫骨的骨骺端，露出骨髓腔；（4）用10ml针管，吸取含双抗的培养基冲出骨髓，反复吹打；（5）收集冲下来的液体，用percoll分离液，密度梯度法离心，取中间界面处白色层；（6）白色层用含双抗的PBS液离心清洗两次；（7）取细胞滤液用锥虫蓝染色检测细胞活性；（8）细胞计数后用完全培养基重悬接种到包被后的培养瓶，置于37℃、5% CO2环境中培养；（9）细胞形态鉴定；（10）ELISA法检测；（11）RT‑PCR检测。
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