[发明专利]运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法

摘要

本发明公开了一种运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，包括如下步骤：一、选取基因组已知大小的鱼类作为标准对照；将所述标准对照及待测鲟鱼分别进行如下操作：尾静脉取血，将血液进行离心、PBS缓冲液洗涤、加入2％多聚甲醛溶液、加入透化剂、染色等处理，用流式细胞仪进行检测，分别得标准对照的荧光强度峰值P₂及待测鲟鱼的荧光强度峰值P₁；二、按照N₁＝N₂×P₁/P₂，获得待测鲟鱼的基因组大小；式中N₁表示待测鲟鱼基因组大小，N₂表示标准对照的基因组大小。采用本发明的方法，能在大规模基因组测序之前，对我国几种主要的鲟鱼养殖品种进行基因组大小的初步测定。

主权项

1.运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，其特征是包括如下步骤：一、选取基因组已知大小的鱼类作为标准对照；将所述标准对照及待测鲟鱼分别进行如下操作：1)、尾静脉取血；2)、将步骤1)所得血液离心，用PBS缓冲液洗涤，最后加入PBS缓冲液至原血液原体积，得红细胞悬液Ⅰ；3)、将50μl的红细胞悬液Ⅰ加入至1±0.01ml的2％多聚甲醛溶液中，混匀，4±1℃放置10～14小时；4)、去除步骤3)所得物的上清，将沉淀用PBS缓冲液洗涤，最后加0.5±0.01ml的PBS缓冲液，得红细胞悬液Ⅱ；5)、在红细胞悬液Ⅱ加入透化剂，所述透化剂由10μl Triton X‑100和20μg Rnase A组成，于室温下透化处理30±5min；6)、将步骤5)所得的透化处理所得物用PBS缓冲液洗涤，最后加0.5±0.01ml的PBS缓冲液，得红细胞悬液Ⅲ；7)、将红细胞悬液Ⅲ进行PI染色；8)、用流式细胞仪进行检测，分别得标准对照的荧光强度峰值P2及待测鲟鱼的荧光强度峰值P1；二、按照N1＝N2×P1/P2，获得待测鲟鱼的基因组大小；式中N1表示待测鲟鱼基因组大小，N2表示标准对照的基因组大小。