[发明专利]一种酶解猪动脉血管制备弹力蛋白肽的方法

摘要

本发明涉及一种酶解猪动脉血管制备弹力蛋白肽的方法，其特征在于采用以下步骤：A、取新鲜的猪动脉血管，清净、沥干、绞碎；B、按一定质量比依次在氢氧化钠水溶液、盐酸水溶液、乙醚中浸泡；C、使用蒸馏水反复洗涤、沥干后在乙酸水溶液浸泡3天，然后离心冷冻，得弹力蛋白粗品；D、将弹力蛋白粗品和去离子水混合后作为酶解底物，用NaOH调pH至8.0‑9.0，加入磷酸盐缓冲液，然后再加入弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶，室温下采用超声辅助酶解，得初步酶解液；E、将所述初步酶解液，在红外线辐射下辅助酶解；灭酶后得酶解液；F、离心处理，取上清液，用超滤膜进行恒体积超滤，得超滤液；G、冷冻干燥，得弹力蛋白肽。本发明具有成本低、酶解效率高的优点。

主权项

1.一种酶解猪动脉血管制备弹力蛋白肽的方法，其特征在于采用以下步骤：A、取新鲜的猪动脉血管，清洗干净后，沥干，用绞肉机绞碎，得碎猪动脉血管；B、按质量比1：20称取所述碎猪动脉血管和0.1mol·L‑1的氢氧化钠水溶液，所述碎猪动脉血管在所述氢氧化钠水溶液中浸泡24h，捞出后用蒸馏水洗至中性；然后用碎猪动脉血管质量20倍的0.6mol·L‑1的盐酸水溶液浸泡24h，然后用蒸馏水洗至中性；最后用碎猪动脉血管质量2倍的乙醚浸泡24h，捞出后再次使用碎猪动脉血管质量2倍的乙醚浸泡24h，得预处理的猪动脉血管；C、将所述预处理的猪动脉血管使用蒸馏水反复洗涤，沥干后用等质量的0.5mol·L‑1的乙酸水溶液浸泡3天，然后采用高速冷冻离心机，在1‑5℃、2500‑4500r·min‑1条件下离心10‑30min，得弹力蛋白粗品；D、按质量比1：20‑100称取所述弹力蛋白粗品和去离子水，混合后作为酶解底物，用1 mol·L‑1的NaOH水溶液调节所述酶解底物pH至8.0‑9.0，加入pH为8.0‑9.0的磷酸盐缓冲液，然后向所述酶解底物中加入弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶，所述弹力蛋白酶与基质金属蛋白酶的质量比为1‑5：1，所述弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶的总质量占酶解底物质量的1‑5%；室温下采用超声辅助酶解，超声波功率100‑400W，时间5‑15min，得初步酶解液；所述基质金属蛋白酶为MMP‑1型；E、将所述初步酶解液，在功率为50‑400W、波长为5‑20μm的红外线辐射下继续辅助酶解3‑10min；当所述初步酶解液温度升至40‑60℃时，关闭红外线，酶解完毕；然后在80‑100℃环境下灭酶处理5‑15min，得酶解液；F、将所述酶解液在12000r/min下离心15min，取上清液，采用截留分子量为10kDa的超滤膜，在超滤压力为0.2MPa，超滤温度40℃的条件下进行恒体积超滤，加水量为酶解液体积的3倍，得超滤液；G、将所述超滤液在‑80℃、‑2Pa条件下冷冻干燥，得弹力蛋白肽。