[发明专利]一种姜药材挥发油提取物中姜辣素含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种姜药材挥发油提取物中姜辣素含量的测定方法，通过超高效液相色谱串联紫外检测器（UPLC‑DAD）的分离分析技术，借助一测多评方法，采用试样中不存在的性能稳定且易得的纯物质N‑香草基壬烷酰胺对照品作为内参物，建立该组分与试样中4个姜辣素组分之间的相对校正因子，通过校正因子计算，实现对姜药材挥发油提取物中的4个姜辣素组分的含量进行测定。本发明操作简单，灵敏度高，准确高效，成本低廉，可以客观，准确的评价姜药材及其提取物与制剂的品质，并用于质量控制，可解决因对照品缺乏而无法客观、合理地控制姜药材挥发油提取物的问题，对控制质量和保证疗效具有重要意义。

主权项

1.一种姜药材挥发油提取物中姜辣素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备分别精密称定N‑香草基壬烷酰胺、6‑姜酚、8‑姜酚、10‑姜酚和6‑姜烯酚5种对照品，用甲醇溶解稀释，制得各单一对照品储备液，然后量取单一对照品储备液，用甲醇稀释混匀，制得混合对照品标准溶液；同时，配制质量浓度分别为CoL及CoH的N‑香草基壬烷酰胺标准溶液，CoL小于CoH；将混合对照品标准溶液及N‑香草基壬烷酰胺标准溶液冷冻避光保存；(2)供试品溶液的制备直接取姜药材挥发油提取物，加入步骤(1)制得的N‑香草基壬烷酰胺对照品储备液或N‑香草基壬烷酰胺标准溶液，混合并用溶剂定容，得到供试品溶液；或者将姜药材挥发油提取物用50％～100％甲醇稀释，得到提取物母液，再取提取物母液，加入步骤(1)制得的N‑香草基壬烷酰胺对照品储备液或N‑香草基壬烷酰胺标准溶液，混合并用溶剂定容，得到供试品溶液；其中，供试品溶液中N‑香草基壬烷酰胺的含量为2.0～100.0μg/mL；(3)相对校正因子fox和相对保留时间RtR的计算用UPLC‑DAD进行测定，进样系列浓度的步骤(1)制备得到的混合对照品标准溶液，获得DAD色谱图并进行峰面积积分，选取N‑香草基壬烷酰胺为内参化合物，分别计算混合对照品标准溶液中N‑香草基壬烷酰胺对6‑姜酚、8‑姜酚、10‑姜酚、6‑姜烯酚的相对校正因子fox和相对保留时间RtR；所述校正因子fox的计算公式为：式中：Ao为内参物N‑香草基壬烷酰胺对照品的峰面积，Co为内参物N‑香草基壬烷酰胺对照品的质量浓度，Ax为被测组分对照品x的峰面积，Cx为被测组分对照品x的质量浓度；所述相对保留时间RtR的计算公式为：式中：tRx为被测组分对照品x的保留时间，tRo为内参物N‑香草基壬烷酰胺对照品的保留时间；(4)供试品中活性成分的测定取步骤(1)制备得到的N‑香草基壬烷酰胺标准溶液及步骤(2)制备得到的供试品溶液进样，用UPLC‑DAD进行测定，获得DAD色谱图，按公式计算供试品溶液中6‑姜酚、8‑姜酚、10‑姜酚、6‑姜烯酚的质量浓度；上述的公式为：C'x＝(C′xL+CxH')/2式中：Cx’为供试品溶液中被测定组分x的质量浓度，CxL’为供试品溶液中被测定组分x相对于浓度为CoL的N‑香草基壬烷酰胺标准溶液所计算出的质量浓度，CxH’为供试品溶液中被测定组分x相对于浓度为CoH的N‑香草基壬烷酰胺标准溶液所计算出的质量浓度，Ax’为供试品溶液中被测组分x的峰面积，AoL为CoL浓度N‑香草基壬烷酰胺标准溶液的峰面积，AoH为CoH浓度N‑香草基壬烷酰胺标准溶液的峰面积，fox为步骤(3)所得N‑香草基壬烷酰胺对被测组分的相对校正因子，N为浓度影响因数。