[发明专利]一种尿液exosome的蛋白标记物的检测方法在审
| 申请号： | 201810368647.8 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN108614119A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 杨俊伟;周阳;曹红娣;熊明霞;江蕾;闻萍;方丽;何伟春;叶红 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学第二附属医院 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 李宏伟 |
| 地址： | 210011 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种尿液exosome的蛋白标记物的检测方法，该方法包括：从新鲜收集的尿液中提取并纯化exosome，收集沉淀并重悬得到exosome悬液；分别用CD13和podocalyxin包被的磁珠对步骤(1)得到的exosome悬液进行分选，得到exosome分选液；将分选液通过用BCA试剂盒测exosome的蛋白浓度；根据蛋白浓度，将各分选液制备为蛋白上样标本，将标本进行CD13、Podocalyxcin和CD63westernblot检测后，鉴定得到所需的蛋白标记物。本发明能够分别提取尿液中podocalyxin和CD13阳性的exosome，有助于进一步对其开展分析和检测，从而精准的反映疾病状态下足细胞和近端肾小管上皮细胞的变化，为疾病诊治提供生物标志物。 | ||
| 搜索关键词： | 分选 尿液 蛋白标记物 蛋白 悬液 检测 肾小管上皮细胞 分析和检测 生物标志物 疾病诊治 疾病状态 足细胞 标本 包被 磁珠 近端 上样 制备 沉淀 新鲜 | ||
【主权项】：
1.一种尿液exosome的蛋白标记物的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)从新鲜收集的尿液中提取并纯化exosome，收集沉淀并重悬得到exosome悬液；(2)分别用CD13和podocalyxin包被的磁珠对步骤(1)得到的exosome悬液进行分选，得到exosome分选液；(3)将步骤(2)得到的分选液通过用BCA试剂盒测exosome的蛋白浓度；(4)根据步骤(3)得到的蛋白浓度，将各分选液制备为蛋白上样标本，将所述标本进行CD13、Podocalyxcin和CD63 western blot检测后，鉴定得到所需的蛋白标记物。
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