[发明专利]一种对肝损伤具有修复作用的菲律宾蛤仔多肽的制备方法

摘要

一种对肝损伤具有修复作用的菲律宾蛤仔多肽的制备方法，该制备方法包括如下步骤：a）建立非酒精性脂肪肝病细胞模型；b）将菲律宾蛤仔去壳取内脏后放入蒸馏水中轻轻搅拌，洗去杂质后匀浆，备用；c）将步骤b）制得的文蛤匀浆液进行酶解，过滤后的滤液经过超滤膜，分别截取3个不同分子段酶解液，用G‑25葡聚糖凝胶层析，对所得的各个峰进行收集，获得菲律宾蛤仔多肽产物；d）将步骤c）获得的菲律宾蛤仔多肽产物分别作用于步骤a）的非酒精性脂肪肝病细胞模型细胞，以筛选使得非酒精性脂肪肝病细胞模型细胞TG含量减低率最大的酶解液进行收集，然后将收集的最大峰酶解液过Zorbax SB‑C18色谱柱，得到两个洗脱峰，收集大的洗脱峰高效液相检测其纯度显示为单一组分，即为对肝损伤具有修复作用的菲律宾蛤仔多肽产品。

主权项

1.一种对肝损伤具有修复作用的菲律宾蛤仔多肽的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤 ：a）建立非酒精性脂肪肝病细胞模型，将正常肝细胞置于DMEM培养液、37℃、5％CO2的培养箱中培养，待细胞贴壁达到80％后弃培养液，0.25％的胰蛋白酶消化，传代培养，选择生长状态良好的细胞，用软脂酸对正常肝细胞进行诱导，处理12h、24h、48h、72h后收集细胞并测定甘油三脂(TG)含量，选择使正常肝细胞TG含量明显增加且细胞生长良好的诱导时间，以建立体外非酒精性脂肪肝病细胞模型；b）将菲律宾蛤仔去壳取内脏后放入蒸馏水中轻轻搅拌，洗去杂质后匀浆，存放于‑20℃或‑80℃备用；c）将步骤b）制得的文蛤匀浆液进行酶解，灭酶后加入活性炭脱苦脱色，过滤出活性炭后的滤液经过超滤膜，分别截取5KDa分子量以下、5KDa～8KDa以及8KDa分子量以上的3个不同分子段酶解液，用G‑25葡聚糖凝胶层析，对所得的各个峰进行收集，获得菲律宾蛤仔多肽产物；d）将步骤c）获得的菲律宾蛤仔多肽产物分别作用于步骤a）的非酒精性脂肪肝病细胞模型细胞，以筛选使得非酒精性脂肪肝病细胞模型细胞TG含量减低率最大的酶解液进行收集，然后将收集的最大峰酶解液于280nm下过Zorbax SB‑C18色谱柱，得到两个洗脱峰，收集大的洗脱峰高效液相检测其纯度显示为单一组分，即为对肝损伤具有修复作用的菲律宾蛤仔多肽产品。