[发明专利]一种菠萝染色体二级结构的样品制备方法

摘要

本发明提供一种菠萝染色体二级结构的样品制备方法，通过配置特定的核裂解液、酶解缓冲液，对菠萝叶片进行样品处理、提取细胞核、酶切、电泳回收条带等步骤，获得菠萝染色体二级结构。通过有效的实验方案来揭示菠萝二级染色体的基本构象，为进一步研究菠萝功能基因，表观遗传等提供更准确的数据支持。

主权项

1.一种菠萝染色体二级结构的样品制备方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：（1）溶液的配制：核裂解液含有：0.25M蔗糖，pH6.8 PIPES 15mM，5mM MgCl2，60mM KCl，15mM NaCl，1mM CaCl2，0.9wt.%Triton X‑100，用前加100ul cocktail和1mM PMSF；酶解缓冲液含有：10wt.%蔗糖，pH 7.5 50mM Tris‑HCl，4mM MgCl2，1mM CaCl2；（2）材料的获得：取菠萝嫩的叶片研磨达成细粉末状；（3）样品处理将研磨好的菠萝叶片粉末转移至50ml离心管，加入核裂解液，至40ml；4℃ 处理30分钟；（4）提取细胞核将处理好的样品分两管，4℃，4000转/min，离心20分钟；去上清，1ml核核裂解液重悬沉淀，转移至1.5ml离心管，4℃，4000转/min，离心20分钟；可再洗一次沉淀，直至沉淀颜色较白；（5）酶切沉淀用1ml的酶解缓冲液悬浮，加0.1UM Nase核酸酶，37℃反应10分钟，加20μl 的0.5M、pH 8.0 EDTA终止反应；（6）电泳回收条带12000g 离心10分钟，取上清，分两管，加入等体积的酚：氯仿抽提一次，酚：氯仿体积比为1:1，然后加入2倍体积乙醇在‑20℃下沉淀DNA 20分钟；12000g离心10分钟，取沉淀，75%乙醇洗一次；电泳并回收200bp DNA条带；（7）准备样品送测序或者PCR回收试剂盒回收目的条带后，进行PCR反应，或者建库后送测序，即获得菠萝染色体二级结构。