[发明专利]一种检测致泻病原微生物的方法

摘要

本发明公开了一种检测致泻病原微生物的方法，涉及微生物检测领域。该方法采用选自以下引物对的引物进行PCR扩增：SEQ ID NO.1‑2、SEQ ID NO.3‑4、SEQ ID NO.5‑6、SEQ ID NO.7‑8、SEQ ID NO.9‑10、SEQ ID NO.11‑12、SEQ ID NO.13‑14、SEQ ID NO.15‑16、SEQ ID NO.17‑18、SEQ ID NO.19‑20、SEQ ID NO.23‑24、SEQ ID NO.25‑26、SEQ ID NO.27‑28、SEQ ID NO.29‑30及SEQ ID NO.31‑32；具有特异性和灵敏度高等特点。

主权项

1.一种检测致泻病原微生物的方法，其特征在于，其包括：以来自待测样本的总核酸提取物为模板，用第一引物对至第十引物对中的一种或几种引物对的组合进行普通PCR扩增，用第十一引物对至第十五引物对中的一种或几种引物对的组合进行RT‑PCR扩增；第一引物对用于检测沙门氏菌invA基因，其包括SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；第二引物对用于检测沙门氏菌ttr基因，其包括SEQ ID NO.3所示的上游引物和SEQ ID NO.4所示的下游引物；第三引物对用于检测痢疾菌ipaH基因，其包括SEQ ID NO.5所示的上游引物和SEQ ID NO.6所示的下游引物；第四引物对用于检测霍乱弧菌ompW基因，其包括SEQ ID NO.7所示的上游引物和SEQ ID NO.8所示的下游引物；第五引物对用于检测霍乱弧菌ctxAB基因，其包括SEQ ID NO.9所示的上游引物和SEQ ID NO.10所示的下游引物；第六引物对用于检测副溶血性弧菌toxR基因，其包括SEQ ID NO.11所示的上游引物和SEQ ID NO.12所示的下游引物；第七引物对用于检测副溶血性弧菌tdh基因，其包括SEQ ID NO.13所示的上游引物和SEQ ID NO.14所示的下游引物；第八引物对用于检测副溶血性弧菌trh基因，其包括SEQ ID NO.15所示的上游引物和SEQ ID NO.16所示的下游引物；第九引物对用于检测空肠弯曲菌hipO基因，其包括SEQ ID NO.17所示的上游引物和SEQ ID NO.18所示的下游引物；第十引物对用于检测腺病毒，其包括SEQ ID NO.19所示的上游引物和SEQ ID NO.20所示的下游引物；第十一引物对用于检测札如病毒，其包括SEQ ID NO.23所示的上游引物和SEQ ID NO.24所示的下游引物；第十二引物对用于检测星状病毒，其包括SEQ ID NO.25所示的上游引物和SEQ ID NO.26所示的下游引物；第十三引物对用于检测轮状病毒，其包括SEQ ID NO.27所示的上游引物和SEQ ID NO.28所示的下游引物；第十四引物对用于检测诺如病毒GI型，其包括SEQ ID NO.29所示的上游引物和SEQ ID NO.30所示的下游引物；第十五引物对用于检测诺如病毒GII型，其包括SEQ ID NO.31所示的上游引物和SEQ ID NO.32所示的下游引物；各引物对中的上游引物的5’端或下游引物的5’端标记有用于与催化酶结合的第一亲和物。