[发明专利]一种从蛹虫草培养基下脚料中提取并分离纯化多糖的方法

摘要

本发明公开了一种从蛹虫草培养基下脚料中提取并分离纯化多糖的方法，该方法包括以下步骤：将蛹虫草大米培养基下脚料粉碎后加水回流提取，将提取液浓缩，加入乙醇静置过夜，离心取沉淀为蛹虫草培养基多糖提取物；多糖提取物加入H2O2脱色，然后加入木瓜蛋白酶酶解，再加入Sevage试剂，离心取上清，为粗多糖；上离子交换层析柱，用NaCl溶液进行梯度洗脱，得到多个多糖组分。采用本发明的方法可以完成大通量的多糖提取操作，适用于工业化大规模生产，DEAE离子交换层析柱分离效果好，重复性好，所得到的多糖组分纯度高、性质稳定。

主权项

1.一种从蛹虫草培养基下脚料中提取并分离纯化多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)提取蛹虫草培养基多糖：将蛹虫草大米培养基下脚料干燥后粉碎，过筛得下脚料干粉；称取干粉加入15‑16倍质量的蒸馏水，超声波处理30min以上，在70‑80℃下回流提取1.5‑2.0h，提取若干次合并提取液，提取液过滤后浓缩，得到多糖浓缩液；在多糖浓缩液中加入3‑4倍体积的95％(V/V)乙醇，搅拌后于4℃中静置过夜；离心后将沉淀烘干得到蛹虫草培养基多糖提取物；(2)蛹虫草培养基多糖的脱色：将蛹虫草培养基多糖提取物加蒸馏水溶解，调节pH值至8.0‑8.5，滴加H2O2溶液至无色，50‑55℃保温2h以上；(3)酶法结合Sevage法脱蛋白：3‑1：将木瓜蛋白酶溶液与蛹虫草培养基多糖提取液混合，两者的体积比为1.0:1.5～1.0:1.7，60‑70℃酶解2‑3h；3‑2：在酶解液中加入1/5体积的Sevage试剂，振荡培养30min以上，然后多次离心直至无蛋白沉淀析出为止，取上清液，烘干得到蛹虫草培养基粗多糖；(4)蛹虫草培养基多糖的分离纯化：将蛹虫草培养基粗多糖用蒸馏水溶解后上DEAE琼脂糖凝胶FF离子交换层析柱，用NaCl溶液进行梯度洗脱，得到多个多糖组分。