[发明专利]基于干酪乳酸杆菌L.casei 393制备水溶性纳米硒微球的方法

摘要

本发明涉及一种基于干酪乳酸杆菌L.casei 393制备水溶性纳米硒微球的方法，L.casei 393为Lactobacillus casei 393的缩写。用MRS固体培养基对干酪乳酸杆菌L.casei 393菌株进行活化培养，再进行厌氧富硒培养，利用干酪乳酸杆菌L.casei 393将有毒的亚硒酸钠转化为无毒的细胞内生物纳米硒。对干酪乳酸杆菌L.casei 393细胞内纳米硒的分离提取得到纳米硒微球冻干粉。所得的纳米硒微球的粒径为30‑300nm；纳米硒微球表面包被有多糖和蛋白质，并且该纳米硒微球易溶于水。所述的纳米硒微球具有较强的抗氧化活性。

主权项

1.一种基于干酪乳酸杆菌L.casei 393制备水溶性纳米硒微球的方法，其特征在于：L.casei 393经厌氧富硒发酵将毒性的亚硒酸钠转化为无毒的红色单质纳米硒，并将其富集于菌体细胞内，对发酵产物中的富硒菌体进行分离提取得到水溶性纳米硒微球，具体步骤如下：步骤1、用MRS固体培养基对干酪乳酸杆菌L.casei 393菌株进行活化培养：将L.casei 393划线接种于MRS固体培养基，于37±1℃厌氧培养48±1h；所述MRS固体培养基配方如下：蛋白胨1±0.1％，牛肉1±0.1％，酵母膏0.5±0.01％，柠檬酸氢二铵0.2±0.01％，葡萄糖2±0.1％，乙酸钠0.5±0.01％，磷酸氢二钾0.2±0.01％，七水硫酸镁0.06±0.01％，一水硫酸锰0.025±0.01％，吐温80 0.1±0.01％，琼脂2±0.1％，pH 6.2‑6.6；步骤2、厌氧富硒培养：将活化后的干酪乳酸杆菌L.casei 393的单菌落用MRS液体培养基，37±1℃静置培养24±1h后，向培养基中加入终浓度为1.2mM的亚硒酸钠，继续37±1℃静置厌氧培养24±1h，将毒性的亚硒酸钠转化为无毒的红色单质纳米硒，并将其富集于菌体细胞内得到发酵产物；MRS液体培养基配方如下：蛋白胨1±0.1％，牛肉1±0.1％，酵母膏0.5±0.01％，柠檬酸氢二铵0.2±0.01％，葡萄糖2±0.1％，乙酸钠0.5±0.01％，磷酸氢二钾0.2±0.01％，七水硫酸镁0.06±0.01％，一水硫酸锰0.025±0.01％，吐温80 0.1±0.01％，pH 6.2‑6.6；步骤3：采用溶菌酶处理、超声破碎及有机‑水相萃取系统相结合的方法对发酵产物中富集的纳米硒进行分离提取，得到水溶性纳米硒微球。